udara diruangan makin terasa dingin, riuh terdengar para kreator bertanya silih berganti, tak sabar meminta jawaban

Hmmm……. mereka semua pinter pinter,  sedangkan aku banyak sekali kesulitan dalam belajar  kali ini…… kompoter jg belum bisa dipake

Zalovic’s diary

Ya Allah…jika aku jatuh cinta
cintakanlah aku pada seseorang
yang melabuhkan cintanya pada-Mu
Agar bertambah kekuatan ku untuk mencintai-Mu. …

Ya Allah…..Jika aku jatuh cinta
Jagalah
cintaku padanya
agar tidak melebihi cinta ku kepada Mu
Ya Allah…Jika aku jatuh hati….
Izinkanlah aku menyentuh hati seseorang
yang hatinya tertaut pada Mu
agar tidak aku terjatuh dalam jurang cinta nafsu…

Ya Rabbani….jika aku jatuh hati
jagalah hati ku padanya agar tidak aku berpaling kepada Mu
Ya Rabbul Izzati……Jika aku rindu
jagalah rinduku padanya
agar tidak aku lalai dalam merindukan syurga Mu…
Ya Allah….Jika aku menikmati cinta dari kekasih Mu
Janganlah kenikmatan itu melebihi kenikmatan indahnya
bermunajat di sepertiga malam terakhir Mu

Ya Allah….jika aku jatuh hati pada seseorang
jangan biarkan aku tertatih-tatih dan terjatuh
dalam perjalanan yang panjang
dalam menyeru manusia kepada Mu
Ya Allah….jika kau halalkan aku untuk merindui seseorang
jangan biarkan aku melampaui batas
sehingga melupakan aku pada cinta yang hakiki
dan rindu abadi hanya pada Mu

Ya Allah…..Engkau mengetahui bahawa hati-hati ini telah berhimpun
dalam cinta pada Mu
Telah berjumpa untuk taat kepada Mu
telah bersatu dalam dakwah Mu
telah berpadu dalam membela syariat mu
Kukuhkanlah ikatannya

Ya Allah
kekalkanlah ikatannya
tunjukilah jalan-jalannya
penuhilah hati-hati ini dengan Nur Mu yang tidak pernah pudar
lapangkan lah dada-dada kami dengan keimanan kepada Mu
dan keindahan bertwakal ke jalan Mu

hm……… mau tau caranya,

1. ajak dia membahas sebuah bisnis, pr, tugas kuliah dll yang terkesan anda memiliki kesulitan dibidang tersebut

2. sebagai rasa terimakasih anda ajak dia berkencan

3. pilih suasana romantis dengan tempat yang tidak biasanya dilalui kendaraan umum (karena lalulalang’y kendaraan umum mengganggu suasana hati)

4. pilihlah rumah makan yang terkesan mewah yang hanya menerima pembayaran cash

5. gunakan tanggal 25-27 sebagai tanggal keberuntungan

6. pilihlah menu makan yang paliiiing mahal

7. setelah makanan hampir habis barulah anda menyatakan isi hati anda  SAYA JAMIN ANDA TIDAK AKAN DITOLAK

KARENA BIASANYA TANGGAL TUA ORANG LG PADA BOKE, DARIPADA MALU GA BISA BAYAR MAKAN KAN MENDING NERIMA CINTA ANDA  Ya kaaaaaan………. seperti kata pepatah ” bila kamu jadi kekasihku apapun akan aku berikan, tapi bila kamu tidak mau jadi kekasihku, seribu pera kpun AKAN KU TAGIH……..

SSSSsssssstttt, jangan terlalu percaya… bukan jaminan DIA JUGA LAGI BOKE, Hee……….

Langkah ku, dalam simpangan

Tak dituju tidak beraarah

Dalam waktu yang tidak tertentukan

Yang tidak akan pernah dijawab

Langkahku hanya bisa mengharap

Bila andaikan waktu terulang

Aku akan jadi bidadari

Yang berbingkai pelangi

Langkahku………

Tinggal langkahku untuk menempuh

Bukan di ditunggu namun di raih

Aku tau dan harus tau

Dan semuanya harus tau

Anugerah tuhan bukan untuk di hindari

Bukan untuk dinilai

menjujjung tinggi kehadirannya

Karena Cinta memiliki harapan dan impian pada tempatnya.

1.1. Latar Belakang

Peningkatan kualitas sumber daya manusia merupakan hal yang sangat penting dalam menyongsong era globalisasi. Salah satu upaya peningkatan kualitas sumber daya manusia adalah melalui pendidikan.

Pendidikan merupakan faktor utama yang secara signifikan mempengaruhi pertumbuhan ekonomi suatu bangsa, baik secara langsung maupun tidak langsung.

Dalam rangka menunjang hal tersebut di atas dan kebijakan pemerintah tentang permintaan kebutuhan tenaga pengajar yang berkualifikasi di bidang pertanian, kehutanan, perikanan dan kelautan. Pada tingkat madya untuk memenuhi kebutuhan tenaga pengajar pada Sekolah Menengah Kejuruan (SMK) yang baru di beberapa daerah. Pusat Pengembangan Penataran Guru (PPPG) Pertanian bekerjasama dengan Universitas Jendaral Soedirman (Unsoed) menyelnggarakan Program Diploma 3 Guru Kejuruan Agribisnis Pertanian, Pengelolaan Sumber Perikanan dan Kelautan.

Mengacu pada Kurikulum Program Diploma 3 Guru Kejuruan fase / tahun ke 2 (dua) adalah praktik lapangan berupa magang industri dengan bobot 10 SKS. Sehingga pada pelaksanaan magang industri mahasiswa dituntut untuk mempelajari ilmu pada bidangnya di industri masing-masing. Selain itu mahasiswa juga bisa menerapkan ilmu yang diperoleh selama tahun pertama sehingga mampu sebagai bahan pertimbangan mahasiswa mengenai kemampuan yang dimiliki.

1.2. Tujuan

Adapun tujuan mahasiswa dari pelaksanaan magang ini adalah :

1. Mahasiswa mampu menerapkan ilmu yang diperoleh selama 1 tahun pertama.
2. Mahasiswa memperoleh pengalaman riil di lapangan.
3. Sebagai pemenuhan persyaratan akademik.

1.3. Sasaran

Sasaran utama yang harus dicapai mahasiswa meliputi :

1. Mampu mengetahui ilmu, keterampilan dan teknologi di bidang kultur jaringan tanaman.
2. Mengetahui lebih jauh ruang lingkup dari teknologi KJT.
3. Melatih pengalaman mahasiswa sehingga menjadi lebih tepat, cepat, dan telaten dalam pengolahan metode kultur jaringan tanaman.

TINJAUAN PUSTAKA

2.1. Perkembangan KJT

Kultur jaringan tanaman merupakan teknik menumbuh-kembangkan baigan tanaman, baik berupa sel, jaringan, atau organ dalam kondisi aseptik secara in vitro. Teknik ini dicirikan oleh kondisi yang aseptik, penggunaan media kultur buatan dengan kandungan nutrisi lengkap dan ZPT (zat pengatur tumbuh), serta kondisi ruang kultur yang suhu dan pencahayaannya terkontrol.

Berdasarkan bagian tanaman yang dikulturkan, secara lebih spesifik terdapat beberapa tipe kultur, yaitu kultur kalus, kultur suspensi sel, kultur akar, kultur pucuk /tunas, kultur embrio, kultur ovul, kultur anter dan kultur kuncup bunga. Namun, semua jenis kultur tersebut sering disebut dalam istilah umum, yaitu kultur jaringan.

Kemajuan yang dicapai dalam meregenerasikan tanaman secara in vitro, dari sel atau bagian tanaman ternyata berdampak luas bagi kemajuan bidang pertanian. Aplikasi kultur jaringan di bidang pertanian menurut Murashige (komunikasi personal) meliputi hal sebagai berikut :

1. Produksi tanaman bebas patogen.
2. Produksi bahan-bahan farmasi.
3. Pelestarian plasma nutfah.
4. Pemuliaan tanaman dan rekayasa genetika.
5. Perbanyakan klonal tanaman dengan cepat.

Dalam pemuliaan tanaman, teknik kultur jaringan dapat digunakan untuk keperluan sebagai berikut :

1. Menyimpan plasma nutfah dengan perlakuan suhu rendah (5 – 15^oC) dan menyimpan kultur secara kryogenik (cryopreservation) dengan fasilitas nitrogen cair.
2. Menyelamatkan embiro, yaitu dengan mengulturkan embrio muda secara in vitro.
3. Memperbanyak klonal tanaman dari galur tetua yang ditujukan untuk produksi benih hibrida.
4. Memproduksi tanaman haploid dengan kultur anter, pollen atau mikrospora, dan kultur ovul untuk menghasilkan tanaman haploid dan galur murni.
5. Mendeteksi dan menginduksi keragaman somaklonal dalam kultur sel, kalus embriogenik dan tanaman regeneran dengan sistem seleksi yang diarahkan untuk karakter agronomi tertentu.
6. Memanipulasi kulutr protoplas seperti fusi protoplas.
7. Merekayasa genetik tanaman.

Dibandingkan dengan perbanyakan tanaman secara konvensional, perbanyakan tanaman secara kultur jaringan mempunyai beberapa kelebihan sebagai berikut :

1. Untuk memperbanyak tanaman tertentu yang sulit atau sangat lambat diperbanyak secara konvensional. Perbanyakan tanaman secara kultur jaringan menawarkan peluang besar untuk menghasilkan jumlah bibit tanaman yang banyak dalam waktu relatif singkat sehingga lebih ekonomis.
2. Perbanyakan tanaman secara kultur jaringan tidak memerlukan tempat yang luas.
3. Teknik perbanyakan tanaman secara kultur jaringan dapat dilakuakan sepanjang tahun tanpa bergantung pada musim
4. Bibit yang dihasilkan lebih sehat.
5. Memungkinkan dilakukannya manipulasi genetik.

Walaupun banyak kelebihannya, teknik ini juga mempunyai beberapa kelemahan sebagai berikut :

1. Dibutuhkan biaya awal yang relatif tinggi untuk laboratorium dan bahan kimia.
2. Dibutuhkan keahlian khusus untuk melaksanakannya.
3. Tanaman yang dihasilkan berukuran kecil, aseptik dan terbiasa hidup di tempat yang berkelembaban tinggi sehingga memerlukan aklimatisasi ke lingkungan eksternal.

2.2. Prinsip Dasar Kultur Jaringan Tanaman

A. Prinsip Dasar

1. Mengetahui Teori Totipotensi Sel

Teori totipotensi sel dikemukakan oleh Schwan dan Schleiden pada tahun 1838, menurut teori ini, setiap sel tanaman hidup mempunyai informasi genetik dan perangkat fisiologis yang lengkap untuk dapat tumbuh dan berkembang menjadi tanaman utuh, jika kondisinya sesuai. Pada saat itu, sel tanaman mampu berkembang menjadi tanaman utuh masih merupakan hipotesis. Banyak usaha untuk membutktikannya mengalami kegagalan, yang mungkin disebabkan oleh keterbatasan pengetahuan mengenai nutrisi dan hormone tanaman pada masa itu. Pada tahun 1920-an, kultur organ secara terus-menerus dalam satu media berhasil dilakukan, tetapi hal ini belum membuktikan kebenaran teori totipotensi. Pada pertengahan tahun 1930-an teori tersebut dapat dibuktikan. Keberhasilan pembuktian teori totipotensi ini diduga berkat penemuan auksin, yaitu IAA dan NAA.

1. Memahami Konsep Skoog dan Miller

Pada tahun 1957, Skoog dan Miller mengemukakan bahwa regenerasi tunas dan akar in vitro dikontrol secara hormonal oleh ZPT sitokinin dan auksin. Organogenesis adalah proses terbentuknya organ seperti tunas atau akar, baik secara langsung dari permukaan eksplan atau secara tidak langsung melalui pembentukan kalus terlebih dulu.

1. Memahami Sifat Kompeten, Dediferensiasi, dan Determinasi

Sifat kompeten, dediferensiasi dan dterminasi sel atau jarigan eksplan sangat penting agar terjadi organogenesis atau embriogenesis pada eksplan. Suatu sel atau jaringan dikatakan kompeten jika sel atau jaringan tersebut mampu memberikan tanggapan terhadap signal lingkungan atau signal hormonal. Bentuk tanggapannya berupa pemrograman diri yang mengarah ke proses organogenesis atau embriogenesis. Eksplan yang dikondisikan di lingkugnan dengan penambahan ZPT yang cocok akan menjadi kompeten untuk membentuk organ atau embrio. Istilah lain proses ini adalah induksi (inductive event).

1. Memahami Tata cara Perbanyakan Tanaman

Tata cara pembiakan tanaman secara kultur jaringan dapat dibagi menjadi beberapa tahap yang berurutan sebagai berikut :

1. Tahap 0, memilih dan menyiapkan tanaman induk untuk eksplan.
2. Tahap 1, inisiasi kultur atau culture establishment.
3. Tahap 2, multiplikasi atau perbanyakan propagul (bahan tanaman yang diperbanyak seperti tunas atau embrio).
4. Tahap 3, mempersiapkan untuk transfer propagul ke lingkungan eksternal yaitu pemanjangan tuns, induksi, dan perkembangan akar.

2.3. Media Tumbuh Tanaman

A. Komponen Media

Media kultur merupakan salah satu faktor penentu keberhasilan perbanyakan tanaman secara kultur jaringan. Berbagai komposisi media kultur telah diformulasikan untuk mengoptimalkan pertumbuhan dan perkembangan tanaman yang dikulturkan. Media kultur tersebut, fisiknya dapat berbentuk cair atau padat. Media berbentuk padat menggunakan pemadat media, seperti agar-agar atau gelrite. Komponen media kultur yang lengkap sebagai berikut.

1. Air distilata (aquades) atau air bebas ion sebagai pelarut atau solven.
2. Hara-hara makro dan mikro
3. Gula (umumnya sukrosa) sebagai sumber energi
4. Vitamin, asam amio, dan bahan organik lain.
5. Zat pengatur tumbuh
6. Suplemen berupa bahan-bahan alami, jika diperlukan.
7. Agar-agar atau gelrite sebagai pemadat media.

1. Aquades

Air yang digunakan untuk membuat media harus benar-benar berkualitas tinggi, karena air meliputi lebih dari 95% komponen media. Terhambatnya pertumbuhan tanaman yang dikulturkan dapat disebabkan oleh rendahnya kualitas air yang digunakan. Untuk kepentignan penelitian, sebaiknya digunakan air distilata (aquades) atau air distilata ganda (aquabides). Sementara itu, untuk kepentingan komersial, sebaiknya digunakan aquades atau setidaknya air bebas ion. Air sumur sebaiknya tidak digunakan karena mengandung terlalu banyak kontaminasi bahan inorganik, organik atau mikroorganisme. Karena itu, sebuah laboaratorium kultur jaringan layaknya mempunyai alat penyulingan air (water distillator) atau setidaknya alat pembuat air bebas ion (deionizer). Cara kerja distilator dalam menghasilkan air distilata adalah dengan cara mengubah air menjai uap air, kemudian mengondensasikan uap air tersebut. Maka, jadilah air distilata yang tidak lagi berisi mineral atau senyawa organik.

1. Hara Makro dan Mikro

Kebutuhan nutrisi mineral untuk tanaman yang dikulturkan secara in vitro pada dasarnya sama dengan kebutuhan hara tanaman yang ditumbuhkan di tanah, meliputi hara-hara makro dan mikro. Hara makro adalah hara yang dibutuhkan tanaman dalam jumlah banyak, sedangkan hara mikro dibutuhkan tanaman dalam jumlah sedikit. Hara makro meliputi N, P, K, Ca, Mg dan S, sedangkan hara mikro meliputi Fe, Cu, Mn, Zn, B, Mo dan Co. untuk melarutkannya dalam air, unsur-unsur hara tersebut harus dalam bentuk garam. Khusus Fe, biasanya diberikan dalam bentuk FeSO₄, dibutuhkan agen pengelat berupa Na₂EDTA. Bentuk lain sumber besi adalah NaFeEDTA.

1. Gula

Gula digunakan sebagai sumber energi dalam media kultur, karena umumnya bagian tanaman atau eksplan yang dikulturkan tidak autotrof dan mempunyai laju fotosintesis sangat rendah. Gula yang paling sering digunakan adalah sukrosa. Untuk itu, gula pasir yang digunakan sehari-hari dapat dipakai karena mengandung 99,9% sukrosa. Glukosa dan fruktosa dapat digunakan, tetapi harganya lebih mahal dan hasilnya tidak selalu lebih baik daripada sukrosa.

Konsentrasi sukrosa yang digunakan berkisar 1 – 5% (10 – 50 g/l), tetapi untuk kebanyakan pengulturan, 2 – 3% sukrosa umumnya merupakan konsentrasi yang optimum.

1. Vitamin dan Bahan Organik Lain

Vitamin, asam amino dan bahan organik lain seperti mioinositol merupakan komponen media yang berpengaruh baik terhadap pertumbuhan kultur. Vitamin yang sering digunakan dari kelompok vitamin B, yaitu tiamin-HCl (vitamin B₁), piridoksin-HCl (Vitamin B₆), asam nikotinak dan riboflavin (vitamin B₂). Dari ketiga vitamin ini, yang terpenting adalah tiamin. Vitamin C, seperti asam sitrat dan asam askorbat, kadang-kadang digunakan sebagai antioksidan untuk mencegah atau mengurangi pencokelatan atau penghitaman (broning) eksplan.

Asam amino sebagai sumber nitrogen organik relatif jarang diperlukan, karena sumber nitrogen utama dalam media biasanya NO₃ dan NH₄. Namun, jika diperlukan sebagai sumber nitrogen organik, asam amino yang sering digunakan adalah L-glutamin, asam aspartat, L-Arginin, dan glisin. Glisin dalam jumlah sedikit (2 mg/l) juga sering digunakan untuk melengkapi bahan vitamin sebagai sumber bahan organik. Senyawa lain yang sering digunakan sebagai sumber nitrogen tambahan dalam media kultur di antaranya kasein hidrolisat, laktalbumin hirolisat, tripton, dan peptone.

Mio-inositol atau meso-inositol merupakan heksitol (gula alkohol berkarbon enam) sering digunakan sebagai salah satu komponen media yang penting, karena terbutki merangsang pertumbuhan jaringan yang dikulturkan. Mio-inositol dapat digunakan pada konsentrasi 10 – 5.000 mg/l, tetapi paling efektif pada konsentrasi 100 mg/l.

1. Bahan Suplemen Alami (Complex Adenda)

Bahan-bahan suplemen alami, seperti jus tomat, jus jeruk, air kelapa, ekstrak malt, ekstrak ragi, kentang, dan bubur pisang, kadang-kadang digunakan sebagai penambah media, terutama jika zat-zat yang sudah terindentifikasi belum dirasa cukup untuk pertumbuhan kultur. Bahan-bahan ini dipercaya merupakan sumber berbagai asam amino, peptide, vitamin dan zat pengatur tumbuh alami. Walaupun belakangan ini penggunaan bahan suplemen alami semakin berkurang karena semakin majunya penelitian tentang komposisi senywa anorganik, asam amino dan ZPT dalam media, suplemen alami tertentu seperti bubur pisang (banana homogenate) dan air kelapa masih biasa digunakan untuk megulturkan berbagai jenis anggrek.

1. Zat pengatur tumbuh

Salah satu komponen media yang menentukan keberhasilan kultur jaringan adalah jenis dan konsentrasi ZPT yang digunakan. Jenis dan konsentrasi ZPT tergantung pada tujuan dan tahap pengulturan. Contohnya, pada pengulturan untuk menumbuhkan dan menggandakan tunas aksilar atau merangsang tumbuhnya tunas-tunas adventif, ZPT yang digunakan adalah sitokinin atau campuran sitokinin dengan auksin rendah. Jenis sitokinin yang sering dipakai adalah BA (benziladenin) karena efektivitasnya tinggi dan harganya relatif murah. Sitokinin jenis lain yang dapat digunakan adalah kinetin (futuril-aminopurin) dan 2-iP. Namun, kedua jenis sitokinin ini harganya lebih mahal dan efektivitasnya lebih rendah daripada BA. Penggunaan sitokinin BA, kinetin, dan 2-iP sering berkisar pada konsentrasi 0,5 – 10 mg/l. Jenis sitokinin lain yang bukan turunan adenine adalah thidiazuron. Thidiazuron mempunyai efektivitas lebih tinggi atau setidaknya sama dengan BA, tetapi di Indonesia relatif sulit diperoleh dan harganya sangat mahal.

Pengulturan untuk merangsang pembentukan akar pada tunas, biasanya menggunakan ZPT auksin. Jenis auksin yang sering digunakan untuk pengakaran in vitro adalah IBA dan NAA, karena efektivitasnya tinggi dan harganya relatif murah.

1. Bahan Pemadat Media

Eksplan yang dikulturkan harus selalu bersinanggungan atau terkena medianya, tetapi tidak tenggelam sehingga aerasinya baik. Media kultur bisa berbentuk cair atau padat. Jika berbentuk cair, kultur harus selalu digoyangkan dengan shaker agar aerasi yang baik tetap terjaga. Jika tidak digoyang atau dikocok, eksplan akan tenggelam seluruhnya, sehingga kondisi anaerobik dapat menyebabkan kematian. Jika medianya padat, diperlukan bahan pemadat media. Idealnya, bahan pemadat media harus dapat disterilisasi dengan autoklaf. Juga gel yang terbentuk tidak dapat dicerna oleh enzim-enzim tanaman dan tidak bereaksi dengan komponen media kultur. Pemadat media yang sering digunakan adalah agar-agar.

Agar adalah campuran berbagai polisakarida dari galaktosa yang diekstrak dari ganggang laut, terutama Gellidium amansii dan ganggang lain dari golongan Rodhopyta. Umumnya, agar dapat membentuk gel atau memadat pada suhu 40 – 45^oC dengan titik cair 80 – 90^oC. bentuk cair atau padat dari agar bersifat dapat balik. Kemampuan agar dalam memadatkan media tergantung pada cara pengekstrakannya dari ganggang dan pH larutan media sebelum diautoklaf. Dalam larutan media dengan pH rendah (kurang dari 4,5), gel yang terbentuk oleh agar sangat encer, sedangkan larutan dengan pH tinggi (lebih dari atau sama dengan 5,5) akan berbentuk padat.

Jenis agar-agar yang sering digunakan dalam penelitian kultur jaringan adalah Difco-bacto agar, Difco-purified agar, dan Taiyo agar (TCagar). Agar-agar untuk kue yang tersedia di pasar dari berbagai merek dapat digunakan tanpa efek yang merugikan, walalupun konsentrasi penggunaannya sedikit berbeda. Konsentrasi agar dalam media lazimnya berkisar 6 – 10 g/l.

Pemadat media lain yang semakin banyak disukai adalah Gelrite^TM (buatan Kelco). Gelrite adalah gellan gum_­, suatu hetero-polisakarida yang dihasilkan bakteri Pseudomonas elodea, terdiri dari molekul-molekul K-glukuronat, rhamnosa, dan selobiosa. Sebagai bahan pemadat media, Gelrite memiliki sifat-sifat yang menguntungkan sebagai berikut :

1. Gelnya lebih jernih.
2. Untuk memadatkan media dibutuhkan lebih sedikit daripada agar, sekitar 1,5 – 3 g/l.
3. Lebih murni dan konsisten dalam kualitas.
4. Kemampuan gelrite memadatkan media tidak tergantung pada pH, tetapi pada adanya partikel-partikel solute, seperti garam-garam mineral.

Salah satu kelemahan Gelrite adalah cenderung menyebabkan kenaikan kelembapan nisbi (RH) dalam kultur, sehingga sering menyebabkan terjadinya vitrifikasi. Gelrite jarang digunakan untuk produksi plantlet secara komersial, tertutama di Indonesia, karena harganya mahal.

B. Cara Membuat Media

Pembuatan media pada prinsipnya dilakukan dengan melarutkan semua komponen media dalam air, sesuai dengan konsentrasinya pada formulasi yang diinginkan. Namun, penimbangan satu per satu komponen media untuk setiap pembuatan media kultur adalah tidak praktis, dan hanya dapat dilakukan jika jumlah zatnya cukup besar untuk ditimbang. Masalah tersebut dapat diatasi dengan pembuatan larutan stok.

1. Membuat Larutan Stok

Larutan stok adalah larutan berisi satu atau lebih komponen media yang konsentrasinya lebih tinggi daripada konsentrasi komponen tersebut dalam formulasi media yang akan dibuat. Larutan stok bisa dibuat dengan konsentrasi 10, 100 atau 1.000 kali lebih pekat. Jika larutan stok sudah dibuat, pembuatan media dapat dilakukan dengan mengambil sejumlah larutan stok, sehingga konsentrsinya menjadi sesuai dengan yang terdapat dalam formulasi media yang dikehendaki.

Dalam membuat larutan stok, yang perlu diperhatikan adalah penyatuan beberapa komponen media sekaligus dalam suatu larutan stok harus mempertimbangkan kecocokan dan kestabilan sifat kimianya. Dalam larutan stok yang berisi beberapa komponen media jangan ada endapan. Hal ini erat kaitannya dngan ketersediaan hara dalam media untuk eksplan atau tanaman yang dikulturkan. Setelah larutan stok dibuat, pengambilannya untuk membuat media dapat dilakukan dengan cara memipet atau menakarnya dengan gelas ukur.

Formulasi media MS dengan cara pembuatan larutan stok yang berbeda dapat dilihat di Tabel, cara pembuatan larutan stok di Tabel 1 lebih sederhana daripada caranya di Tabel 2. Perlu diingat bahwa cara ini hanya dua alternatif dari cara pembuatan media yang dapat dilakukan. Cara-cara lain, seperti penimbangan satu demi satu komponen media yang cukup besar untuk ditimbang, seperti hara mikro dan mi-inositol, diikuti dengan penambahan larutan stok komponen yang lain juga dapat dilakukan, jika pembuatan media tidak terlalu sering.

Tabel 1. Formulasi media MS (Murashige dan Skoog, 1962) dan pengelompokan senyawa kimia dalam pembuatan larutan stok.

1. Membuat larutan stok Hara Makro

Larutan stok untuk hara makro dapat dijadikan dua, dengan memisahkan CaCl₂.2H₂O dalam stok tersendiri. Stok makro MS dengan kepekatan 10 kali lebih pekat berisi 16,5 g NH₄NO₃, 19 gram KNO₃, 3,7 g MgSO₄.7H₂O dan 1,7 g KH₂PO₄ per liter air. Membuat larutan stok hara makro dilakukan dengan cara sebagai berikut :

-          Siapkan gelas piala ukuran 1 liter yang diisi dengan 500 ml aquades.

-          Timbang setiap komponen makro, lalu masukkan dan larutkan satu demi satu. Untuk menghindari terjadinya endapan, hendaknya jangan memasukkan beberapa komponen media sekaligus.

-          Setelah semua komponen media larut, tambahkan aquades sampai volume akhir menjadi 1.000 ml dengan menggunakan labu ukur atau gelas ukur. Penggunaan gelas piala untuk pengukuran secara akurat sangat tidak dianjurkan.

-          Pada saat membuat media, larutan stok hara makro yang diambil adalah sebanyak 100 ml per liter media.

1. Membuat larutan Stok Ca

Stok Ca dengan konsentrasi 100 kali lebih pekat berisi 44 g CaCl₂.2H₂O per liter air atau 22 g per 500 ml air. Stok Ca perlu dipisahkan dengan stok hara makro lainnya, karena akan terjadi pengendapan jika dijadikan satu. Cara membuat larutan stok Ca lebih mudah, karena hanya berisi satu zat saja. Caranya, siapkan gelas piala ukuran 1 liter yang telah diisi sekitar 400 ml aquades, lalu masukkan 22 g CaCl₂.2H₂O dan aduk sampai larut. Setelah itu, masukkan larutan tadi dalam labu takar berukuran 500 ml, lalu tambahkan aquades hingga volumenya 500 ml. Setelah larutan ditambah dengan aquades hingga volume akhir, larutan stok perlu diaduk lagi sebelum dimasukkan ke dalam botol untuk disimpan. Pada saat membuat media kultur, larutan stok Ca yang diambil sebanyak 10 ml per liter media.

1. Membuat Larutan Stok Mikro A, Mikro B, Vitamin dan Mio-inositol.

Pembuatan larutan mikro A, mikro B, vitamin dan Mio-inositol dilakukan sama seperti pembuatan stok makro. Komponen media ditimbang dan dilarutkan ke dalam aquades satu demi satu sampai larut dan ditambah aquades sampai volume tertentu.

Pada saat membuat media kultur, larutan stok mikro A yang diambil sebanyak 10 ml per liter media. Sementra itu, larutan stok B dan vitamin yang diambil masing-masing sebanyak 1 ml per liter media. Larutan mio-inositol yang diambil sebanyak 20 ml per liter media.

1. Membuat Larutan Stok Besi (Fe)

Pembautan larutan stok besi (Fe) sedikit berbeda dengan pembuatan larutan stok lainnya. Untuk mencegah terjadinya pengendapan, setiap komponen (FeSO₄ dan Na₂EDTA) dilarutkan secara tersendiri dalam gelas piala yang terpisah. Contohnya, volume larutan stok akhir yang dibuat sebanyak 1.000 ml, maka FeSO₄ dilarutkan dalam 400 ml aquades dan Na₂EDTA juga dilarutkan dalam 400 ml aquades dalam gelas piala lain. Pelarutan Na₂EDTA sebaiknya dilakukan dengan mengaduk sambil dipanaskan.

Setelah kedua larutan homogen, sedikit demi sedikit kedua larutan dicampur sambil diaduk. Setelah itu, dengan menggunakan labu takar, volume akhir larutan dibuat menjadi 1.000 ml dengan menambahkan aquades. Larutan stok Fe yang benar akan berwarna kuning muda dan jernih. Untuk mencegah terjadinya oksidasi, larutan stok Fe harus disimpan dalam botol berwarna gelap atau botol yang dibungkus dengan aluminium foil. Pada saat membuat media kultur, larutan stok besi yang diambil sebanyak 10 ml per liter media. Semua larutan stok sebaiknya disimpan di dalam lemari es.

C. Tahapan Kultur Jaringan

1. Pemilihan dan Penyiapan Tanaman Induk Sumber Eksplan

Sebelum melakukan kultur jaringan untuk suatu tanaman, kegiatan yang petama harus dilakukan adalah memilih tanaman induk yang hendak diperbanyak. Tanaman tersebut harus jelas jenis, species, dan varietasnya, serta harus sehat dan bebas dari hama penyakit. Setelah ditentukan tanaman induk yang merupakan sumber eksplan, kegiatan berikutnya adalah mempersiapkan dan mengondisikan tanaman induk sedemikian rupa agar eksplan yang digunakan tumbuh baik pada waktu dikulturkan secara in vitro.

1. Inisiasi Kultur

Tujuan utama tahap ini adalah mengusahakan kultur yang aseptik atau aksenik. Aseptik berarti bebas dari mikroorganisme, sedangkan aksenik berarti bebas dari mikroorganisme yang tidak diinginkan. Untuk mendapatkan kultur yang besih dari kontaminasi, eksplan harus disterilisasi. Sterilisasi merupakan upaya untuk menghilangkan kontaminan mikroorganisme yang menempel di permukaan eksplan. Beberapa bahan kimia yang dapat digunakan untuk mensterilkan permukaan eksplan adalah NaCL, CaOCl₂, etanol dan HgCl₂.

1. Multiplikasi atau Perbanyakan Propagul

Pada prinsipnya, tahap ini bertujuan untuk menggandakan propagul atau bahan tanaman yang diperbanyak seperti tunas atau embrio, serta memeliharanya dalam keadaan tertentu sehingga sewaktu-waktu bisa dilanjutkan untuk tahap berikutnya. Pada tahap ini perbanyakan tunas dirangsang, umumnya dengan mendorong percabangan tunas lateral atau merangsang pembentukan tunas adventif. Kondisi ini memerlukan sitokinin seperti BA, 2iP, kinetin atau thidiazuron. Cara pemakaiannya, eksplan yang hidup dan tidak terkontaminasi (aseptik) dari tahap inisiasi kultur dipindahkan atau disubkulturkan ke media yang mengandung sitokinin. Propagul yang dihasilkan dalam jumlah berlipat disubkulturkan terus secara berulang-ulang sampai dicapai jumlah propagul yang diharapkan. Setelah itu, tunas mikro yang dihasilkan dapat diakarkan dan diakimatisasi.

Dua hal penting yang harus diperhatikan dalam tahap ini adalah ratio perbanyakan dan aberasi genetik. Ratio perbanyakan dapat dilihat dari jumlah tunas per eksplan. Ratio perbanyakan pada setiap periode kultur umumnya meningkat dengan meningkatnya konsentrasi sitokinin atau dengan menggunakan jenis sitokinin yang lebih kuat. Namun, ratio yang terlalu tinggi akan berisiko tinggi untuk menghasilkan tanaman off-type dan terjadinya vitrifikasi.

Vitrifikasi adalah abnormalitas pada tanaman yang dikulturkan secara in vitro yang ditandai dengan kandungan air jaringan terlalu tinggi, sukulensi, atau transluceny (tembus cahaya). Tanaman yang mengalami vitrifikasi tampak lemah dan tampak seperti tembus cahaya karena kandungan airnya terlalu tinggi. Gejala vitrifikasi sering disebabkan oleh terlalu tingginya konsentrasi sitokinin, terlalu rendahnya konsentrasi agar, dan tingginya konsentrasi ion ammonium. Karena itu, pilihan yang terbaik bukan pada perlakuan yang menghasilkan tunas terbanyak, tetapi ratio perbanyakan yang cukup tinggi dengan kualitas tunas yang terbaik, dipandang dari segi kestabilan genetik dan vigor tunasnya.

1. Pemanjangan Tunas, Induksi dan Perkembangan Akar

Tunas-tunas yang dihasilkan pada tahap multipliksi dipindahkan ke media lain untuk pemanjangan tunas. Media untuk pemanjangan tunas mengandung sitokinin sangat rendah atau tanpa sitokinin. Tunas tersebut dapat dipindahkan secara individu atau berkelompok. Pemanjangan tunas secara berkelompok lebih ekonomis daripada secara individu. Setelah tumbuh cukup panjang, tunas tersebut dapat diakarkan.

1. Aklimatisasi Plantlet ke Lingkungan Luar

Pada tahap ini, plantlet atau tunas mikro dipindahkan ke lingkungan di luar botol seperti rumah kaca, rumah platik atau screenhouse (rumah kaca kedap serangga). Proses ini disebut aklimatisasi. Aklimatisasi adalah pengondisian plantlet atau tunas mikro (jika pengakaran dilakukan secara ex vitro) di lingkungan baru yang septik di luar botol, dengan media tanah sehingga plantlet dapat bertahan dan terus tumbuh menjadi bibit yang siap ditanam di lapang.

Tahap ini merupakan tahap kritis karena kondisi iklim mikro di rumah kaca, rumah plastik, rumah bibit dan lapangan sangat jauh berbeda dengan kondisi iklim mikro di dalam botol. Kondisi di luar botol berkelembapan nisbi jauh lebih rendah, tidak aseptik dan tingkat intensitas cahayanya jauh lebih tinggi daripada kondisi di dalam botol. Plantlet atau tunas mikro lebih bersifat heterotrik karena sudah terbiasa tumbuh dalam kondisi berkelembapan sangat tinggi, aseptik serta suplai hara mineral dan sumber energi berkecukupan.

Di samping itu, tanaman tersebut memperlihatkan beberapa gejala ketidaknormalan, seperti bersifat sangat sukulen, lapisan kutikula tipis, dan jaringan vaskulernya tidak berkembang sempurna, morfologi daun abnormal dengan tidak berfungsinya stomata sebagaimana mestinya, struktur mesofil berubah, dan aktivitas fotosintesis sangat rendah. Dengan karakteristik seperti itu, plantlet atau tunas mikro mudah menjadi layu atau kering jika dipindahkan ke kondisi eksternal secara tiba-tiba. Karena itu, plantlet atau tunas mikro tersebut perlu diadaptasikan di lingkungan baru yang lebih keras. Dengan perkataan lain, plantlet atau tunas mikro perlu diaklimatisasi.

Aklimatisasi dilakukan dengan memindahkan plantlet atau tunas mikro ke media aklimatisasi dengan intensitas cahaya rendah dan kelembapan nisbi tinggi. Secara berangsur-angsur kelembapannya diturunkan dan intensitas cahayanya dinaikkan. Cara yang paling mudah untuk mengaklimatisasi plantlet adalah dengan memindahkannya ke bak aklimatisasi dengan media campuran tanah, pasir, dan kompos, kemudian disemprot dengan air dan disungkup plastic. Media aklimatisasi yang dipakai bisa juga berupa campuran media lain yang cocok.

HASIL MAGANG

­Pelaksanaan Magang

1. Waktu dan Lokasi
   1. Waktu

Adapun pelaksanaan magang mahasiswa lakukan pada 7 April 2006 s/d 8 Agustus 2006.

1. Lokasi

Lokasi pelaksanaan magang industri yakni :

Nama Industri       : UPB (Unit Pengembangan Benih) Sedau

Alamat                   :  Jln raya pemepek, Desa Sedau

Kabupaten             : Lombok Tengah

Propinsi                 : Nusa Tenggara Barat.

1. Kegiatan-Kegiatan

Adapun pada pelaksanaan magang industri ini mahasiswa mengerjakan kegiatan pokok dan kegiatan sampingan. Dimana kegiatan pokok penulis adalah melakukan perbanyakan pisang secara kultur jaringan, sedangkan kegiatan sampingan penulis adalah perbanyakan anggrek, krisan, pembutan Trikoderma,

1. Kegiatan Pokok
   1. Perbanyakan Pisang secara Kultur Jaringan

Pisang yang dikulturkan adalah pisang Cavendish, Kepok, ketip, Agung, Raja dan masih banyak jenis lainnya namun pada prinsipnya perlakuan yang diberikan pada semua jenis pisang adalah sama, hanya saja untuk msing-masing pisang pada tahap multipliksi komposisi BAP yang diberikan berbeda.

ð  Tahapan Kultur Pisang

1. Pembuatan Media

Media tumbuh yang digunakan adalah MS komposisi media MS adalah :

1.Komposisi Media MS :

1.Komposisi Media MS :

Tabel. 1. formulasi media MS (Murashige dan Skoog, 1962)

Media untuk pisang dibagi menjadi 3 tahapan. 1 media  MSO, MS₁ dan MS₂. hanya saja yang membedakan ke-3 media ini adalah komposisi ZPT, untuk media MSo tanpa ZPt biasa digunakan untuk inisiasi dan MS₁, ZPT yang digunakan adalah BAP berkisar antara 1 – 5 ppm dan media ini digunakan pada tahap maultiplikasi, untuk MS₂ ZPT yang digunakan adalah NAA berkisar antara 3 – 5 ppm dan media ini digunakan untuk pengakaran. Selain itu pada media MS₂ ditambahkan arang aktif berkisar antara 1 – 2,5 per liter.

Tahapan pembuatan media.

Setelah pembuatan stok kita dapat langsung membuat media. Adapun prosedur pelaksanaannya adalah :

1. Menyiapkan alat dan bahan yang diperlukan.
2. Menimbang gula 30 g/l agar 7 – 8 g/l dan Mio-inositol 0,1 g/l.
3. Mengambil larutan stok A, B, C, D, E dan F satu persatu dengan ukurannya masing-masing, dan vitamin serta Zpt yang diperlukan.
4. Tuang agar, mio-inositol dan gula ke dalam panic, untuk memasak media tuang komposisi A, B, C, D, E, vitamin dan ZPT ke dalam panic setelah diterakan.
5. Masak media sampai homogen. Ukur pH yang ditentukan, 5,6 – 5,8 apabila pH terlau tinggi (basa) ditambahkan HCl, sedangkan bila pH rendah (asam) ditambahkan NaOH.
6. Setelah mendidih dan dilakukan pengukuran, kemudian media dituang di dalam botol kultur kemudian disterilisasi.
7. Setelah steril, botol diberi label dan media dapat disimpan dan siap digunakan bila diperlukan.
8. Pemilihan Tanaman Induk

Tanaman induk yang digunakan adalah tanaman induk yang unggul baik dari segi kualitas maupun kuantitasnya bebas dari opt serta jelas asalnya (varietas), apabila telah ditentukan tanaman induk maka kita bisa langsung mengambil anaknya, sebaiknya anakan yang diambil belum mekar helaian daunnya.

1. Inisiasi

Inisiasi adalah tahapan penanaman pertama, sehingga perlakukan yang diberikan merupakan salah satu penentu keberhasilan pada tahap selanjutnya. Adapun prosedur pelaksanaannya adalah :

1. Kupas pelepah dan boggolnya sampai kelihatan bersih.
2. Cuci pada air mengalir dan digosok dengan deterjen menggunakan spon, kemudian dibilas dengan air mengalir sampai bersih.
3. Kupas lagi bonggol dan pelepah sampai ukurannya agak kecil.
4. Masukkan eksplan ke dalam laminar.
5. Siapkan alat dan bahan yang diperlukan.
6. Celupkan eksplan ke dalam alkohol 95% kemudian dibakar sampai agak kecoklatan.
7. Kupas 1 pelepah dan ratakan ukurannya pelepah dengan bonggolnya.
8. Dicelupkan lagi ke dalam alkohol 95% lalu dibakar lagi.
9. Setelah itu dikups lagi sampai ukurannya agak kecil / sesuai untuk ditanam di dalam botol kemudian dicelupkan ke dalam air steril dan larutan betadine.
10. Setelah ukuran sesuai tanam eksplan dalam media, kemudian ditutup rapat dan diisolasi.
11. Beri label, tanggal tanam, dan jenis eksplan, kemudian diinkubasikan di ruang inkubasi.
12. Multiplikasi

Tahapan ini merupakan penggandaan dari tanaman (plantlet). Tahap ini dilakukan 2 kali seminggu atau disesuaikan dengan ukuran eksplan. Adapun prosedur pelaksanaannya adalah sebagai berikut :

1. buka botol, kemudian keluarkan plantlet dari dalam botol.
2. bersihakan platlet dari sisa-sisa broning yang masih menempel di pinggir plantlet.
3. bagi plantlet menjadi beberapa bagian yang sesuai dan msih memiliki titik tumbuh.
4. Tanam ke dalam botol baru kemudian di beri label dan iinkubasikan kembali.
5. Aklimatisasi

Tahap ini merupakan tahapan yang kritis bagi tanaman karena merupakan perpindahan dari kondisi in vitro. Selain itu plantlet harus membuat makanan sendiri sedangkan stomata daun belum terbiasa untuk membuka dan menutup dengan stabil. Sehingga perlu naungan pembatasan pencahayaan, sehingga tahap ini biasanya dilakukan di dalam screen house dengan pot kompot yang diberi sungkup.

Adapun tahap ini mempunyai tahapan sebagai berikut :

1. Keluarkan plantlet dari dalam botol.
2. Pisahkan / bersihkan dari sisa agar di dalam rendaman air
3. Potong akar yang terlalu panjang dan pisahkan sesuai ukuran plantlet
4. Kemudian rendam ke dalam larutan fungisida 2% selama 2 menit.
5. Tanam ke dalam pot kompot dan disungkup di dalam screen house.

Setelah 1 – 2 bulan dari kompot dapat dipindahkan secara individu pada polibag. Kemudian apabila sudah cukup kuat dan sudah mampu beradaptasi dapat dikeluarkan dari screen house dan ditanam di lapangan.

1. Kegiatan Sampingan.
   1. Perbanyakan Anggrek secara Kultur Jaringan

Dalam hal ini penulis pada lokasi industri hanya melakukan hibridisasi pada plantlet anggrek. Adapun pelaksanaannya hanya menggunakan perbedaan benih. Sehingga hanya memindahkan plantlet ke beberapa tahap media, adapun komposisi media yang diberikan adalah sebagai berikut :

Media Sapih

Unsur Makro :

-          KCl                             =   1,5 gr/l

-          KNO₃ =   2 gr/l

-          NaH₂PO₄ =   250 mg/l

-          MgSO₄ =   250 mg/l

-          CaClH₂O                     =   25 mg/l

Unsur Mikro :

N₁ - H₃BO₃ =   6,2 mg/l

-     Na₂MoO₄2H₂O      =   0,25 mg/l

-     Kl                           =   0,53 mg/l

-     CoCl₂6H₂O            =   0,025 mg/l

N₂ -  ZnSO₄7H2O                =            5,6 mg.l

-   CuSo45H2O            =   0,025 mg/l

Bahan Tambahan :

-          Air kelapa                   =   150 cc/l

-          Gula putih                   =   20 gr/l

-          Car coal                       =   0,5 gr/l

-          Pisang                         =   50 gr/l

-          NAA                           =   1 mg/l

-          Thiamin                       =   1 mg/l

Keterangan : pH = 5,1.- 5,8

Cara membuat Media Tabur Biji.

Caranya :

Ê  Menimbang stok vacin dan whent lengkap (stok A, B, C dan D)

Ê  Bahan tambahan :

-          Air kelapa 150 cc/liter

-          Gula putih / pasir 20 gram/liter

-          Agar-agar :

• Agar batang 1 buah/liter
• Agar swallow 1 buah/liter
• Agar bubuk 7 – 8 gram / liter

-          Tomat 50 gram/liter (blender)

-          Thiamin 1 cc/liter

Ê  Setelah itu dicampur menjdi satu dan ditambah air aquades hingga menjadi (1) satu liter.

Ê  Selanjutnya direbus sampai mendidik dan dilihat pHnya.

Ê  Mengenai pH, hal itu tergantung jenis anggreknya;

Ê  Apabila pH nya kurang dari yang diinginkan, harus diberi larutan NAOH 1 N, tetes demi tetes hingga mencapai yang diinginkan.

Ê  Apabila pH nya lebih, maka harus diberi larutan HCl 1N, tetes demi tetes hinga mencapai yang diinginkan.

Ê  Setelah itu baru kita masukkan ke botol, sesuai dengan botol yang diinginkan.

Ê  Ditutup dengan menggunakan tutup botol dan ditutup dengan plastic dan diikat dengan karet.

Ê  Disteril menggunakan autoclave hingga mencapai suhu 122^oC selama kurang lebih 15 – 20 menit.

Ê  Kedudukan media sesuai dengan kebutuhan.

Ê  Kurang lebih 3 – 5 hari media baru siap dipakai

Ê  Untuk botol saus tomat diisi 60 cc.

Cara Membuat Media Sapih / Transfer

Ê  Menimbang stok vacin dan whent lengkap, yaitu sotk A, B, C dan D

Ê  Bahan Tambahan :

-          Agar-agar 1 batang/liter, atau 1 bungkus/liter, atau 7 – 8 gram/liter (pilih salah satu).

-          Gula paisr 20 gram/liter

-          Air kelapa 150 cc/liter

-          Pisang raja 50 gram/liter (blender)

-          Cracool/karbon aktif 2 gram/liter

-          NAA 1 cc/liter

-          Thiamin 1 cc/liter.

Keterangan : Cara pembuatannya sama dengan cara pembuatan media tabur biji.

Cara Membuat Larutan

Cara membuat larutan-larutan media cair maupun hormon-hormon yang dibutuhkan harus dibuat stok dan disimpan di lemari es, suapaya stok tersebut tidak mudah rusak dan tahan lama, hal ini memudahkan kita dalam pembuatan media tersebut.

Cara membuat :

Ê  NAA : kita timbang 100 mg dilarutkan dengan aqudes 100 cc pemakaiannya 1 cc/liter

Ê  Bensil Adenin (BA) : kita timbang 100 mg dilarutkan dengan aquades 100 cc.

Pemakaiannya 1 – 2 cc/liter.

Ê  Thiamin : kita timbang 100 mg dilarutkan dengan aquades 100 cc. pemakaiannya 1 cc/liter.

Cara Membuat Clorox

• Untuk membuat Clorox 10% dengan cara : Clorox 100 cc + 900 cc aquades.
• Untuk membuat Clorox 5% dengan cara : Clorox 50 cc + 950 cc aquades.
• Untuk membuat Clorox 1% dengan cara Clorox : 10 cc + 990 cc aquades.
• Setelah itu disterilkan dengan menggunakan autoclave.
• Clorox tersebut siap pakai.

Syarat-syarat Tanaman induk yang akan diperbanyak dengan cara hibridasi dan kultur jaringan :

Ö        Bebas dari virus

Ö        Mudah dirawat dan subur

Ö        Berproduksi tinggi

Ö        Tangkai bunga tegak lurus

Ö        Jumlah kuntum kurang lebih 15 kuntum

Ö        Warna bunga inddah dan cerah serta banyak diminati masyarakat.

Ö        Susunan daun dan bunga teratur.

Ö        Mempunyai tunas 7 – 10 cm.

Cara-cara menyilang anggrek yang baik :

C  Penyilangan dilakukan pada waktu pagi hari jam 09.⁰⁰

C  Bunga setelah mekar 3 hari

C  Sebagai tanaman induk pejantan harus mempunyai folen berwarna kuning tua

C  Setiap tangkai maksimal 5 kuntum.

C  Diberi label guna mencatat nama silangan, hari, tanggal, bulan dan tahun untuk mengetahui masak dan belummnya buah tersebut.

C  Sebagai induk, nama tanaman harus ditulis terlebih dahulu.

C  Penyilangan boleh dilakukan dengan menggunakan lidi atau pinset.

C  Waktu masak buah anggrek tergantung dari jenis tanaman :

-          Untuk Dendrobium 3 bulan.

-          Untuk species 4 – 5 bulan.

-          Untuk catleya, Vanda dan Paleonopsis 5 – 7 bulan.

C  Setelah buah sudah masak, buah tersebut dibawa ke laboratorium untuk proses.

-          Buah dicuci dengan alokohol

-          Encase/laminar air flow sudah siap diisi :

• Media tabor biji
• Clorox 10%, 5% dan aquades steril.
• Betadine / Fungisida.
• Gagang pisau dan pisau skopel.
• Lampu bonsen
• Pinset bengkok & pinset sendok
• Pipet (semuanya dalam keadaan steril).

Cara kerja :

Apabila buah tersebut pecah maka harus diproses dengan menggunakan Clorox

• 10% selama 10 menit
• 5% selama 5 menit
• 1% selama 1 menit

ð  Kemudian dibilas dengan aquades steril hingga bersih.

ð  Setelah itu biji yang dibilas dengan aquades steril disisakan airnya sedikit lalu dipipet dan dimasukkan ke dalam media tabur biji lalu ditutup dan tutupnya diolesi dengan betadine.

ð  Biji yang ditabur ke dalam media tabur biji tersebut diberi kode, tanggal dan bulan untuk mengetahui proses berikutnya.

ð  Biji anggrek di dalam media tabur kurang lebih 2,5 – 3 bulan, lalu dipindahkan ke dalam media sapih (media II) selama 2,5 – 3 bulan, kemudian dipindah lagi ke media terkahir selama 3 – 4 bulan siap dikompotkan.

Apabila buah tersebut tidak pecah

ð  Maka buah harus dilakukan dengan cara buah dicuci dengan alkohol 96%, lalu dibakar dengan menggunakan lampu bonsan dengan cara yang cepat dan cermat, lalu dipotong dengan pisau skapel dan dimasukkan ke dalam media tabur biji.

ð  Kemudian ditutup dan tutupnya diolesi betadine/fungisida guna mencegah bakteri dan lain-lain, kemudian diikat dengan plastik karet.

Cara mengerjakan kultur jaringan

-          Kita ambil tunas yang sudah dipilih dan sudah diseleksi (diketahui keunggulannya).

-          Tunas anggrek kira-kira berukuran 7 – 10 cm.

-          Tunas kita potong yang berukuran 7 – 10 cm.

-          Dicuci/ direndam dengan menggunakan larutan fungisida selama 10 menit.

-          Tunas siap dikerjakan, dengan catatan : encase/ laminar air flow sudah siap dipakai dan dalam keadaan steril.

-          Di dalam encase/ laminar air flow terdiri dari :

• Media cair
• Larutan Clorox 10%, 5%, 1% dan air aquades yang sudah steril.
• Betadine/ fungisida.
• Alkohol 96%, yaitu untuk sterilisasi alat-alat seperti pinset, pisau, gagang pisau skopel dan tissue.
• Petridis, kapas, tissue yang dibungkus aluminium foil yang sudah steril.
• Lampu bonsen.

Cara kerja

-          Tunas yang berukuran 7 – 10 cm kita masukkan ke dalam larutan Clorox 10% selama 10 menit dan dikocok-kocok.

-          Setelah 10 menit tunas kita angkat dari larutan Clorox dan kita kupas hingga kelebihan mata tunasnya.

-          Setelah itu kita masukkan ke larutan Clorox 5% selama 5 menit dan dikocok-kocok.

-          Tunas kita angkat dan dikerjakan dengan cara mengupas kulit mata tunas sesuai dengan bentuk mata tunas, lalu kita ambil/ potong dengan ukuran mata tunas yang ada dengan bentuk segi tiga/ segi empat.

-          Hasil pengambilan mata tunas, lalu dimasukkan ke dalam larutan Clorox 1% selama 1 menit dan dikocok-kocok.

-          Setelah itu mata tunas kita bilas dengan menggunakan aquades steril hingga berulang-ulang sampai bersih.

-          Mata tunas kita masukkan ke media cair yang menggunakan hormone dan jangan sampai mata tunas jatuh, bila itu terjadi maka mata tuns akan terkontaminasi.

-          Setelah dimasukkan ke media, ujung erlemeyer diolesi betadine dan dibungkus dengan menggunakan kertas aluminium foil dan ditutup plastic dan diikat dengan karet gelang.

Proses selanjutnya :

-          Media cair yang sudah ada mata tunasnya kita goncang/goyang dengan menggunakan alat saccer/ alat penggoncang.

-          Satu hari, satu malam media tersebut digoncang minimal 16 jam akan diberhentikan sebentar guna untuk mendinginkan alat saccer tersebut.

-          Penggoncangan diperlukan antara 70 – 90 rpm (rotasi putaran masa).

-          Media cair yang berada di saccer untuk proses kultur jaringan selama 1 – 2 minggu harus diganti media baru.

-          Kurang lebih 3 – 4 bulan akan keluar PLB (Protocorm Lake Body).

-          Protocorm tersebut kita pisahkan dari induk tunas, untuk diproses/ diperbanyak.

-          Setelah 7 -10 bulan protocorm tersebut kita pindahkan ke media padat yaitu media protocorm.

-          Media padat (media sapih tersebut) bertujuan untuk memperbanyak protocorm, bibit supaya menjadi banyak.

-          Setelah banyak dipindahkan lagi ke media sapih II, supaya cepat menjadi bibit anggrek yang siap dijual atau dikompotkan, tetapi dengan catatan : untuk memindahkan bibit harus disesuaikan dengan bibit-bibit tersbut, contohnya :

• Besar dengan yang besar
• Kecil dengan yang kecil
• Protocorm dengan protocorm (supaya pertumbuhannya serempak).

Pembahasan

Tahap utama dalam pelaksanaan perbanyakan tanaman melalui kultur jaringan adalah :

1. Pemilihan bahan tanaman

Bahan tanaman sangat menentukan keberhasilan perbanyakan. Bila organ yang diambil lebih muda bahakan bila diambil dari jaringan yang meristematik akan lebih mudah dibiakkan, dan lebih sehat tetapi bila bhaan lebih tua tanaman memang lebih cepat beregenerasi akan tetapi lebih rentan terserang virus.

Bagian tanaman yang dikulturkan memiliki respon yang berbeda sehingga untuk mendapatkan hasil yang lebih baik perlu uji coba baigan tanaman yang paling sesuai, seperti halnya pisang kapok dan cavendist daya regeerasi pisang cavendist lebih cepat daripada pisang kapok.

2. Pembuatan Media

Media dasar yang banyak digunakan adalah MS, yang terdiri atas unsure, makro, mikro, vitamin dan gula, perbedaan komposisi media kultur jaringan lain biasanya pada jenis dan konsentrasi makro dan mikronya serta pH media juga harus sesuai, pH yang ideal untuk pertumbuhan tanaman adalah 5,7.

3. Sterilisasi Media

Media harus dieterilisasi hingga benar-benar tidak mengandung mikroorganisme sehingg perlu dilakukan sterilisasi di dalam autoklaf selama 120^oC dengan tekanan 151 atau samapi 15 psi dalam waktu 15 menit.

4. Sterlisasi bahan eksplan

Secara alami bahan tanaman mengandung mikroorganisme, sehingga perlu dilakukan sterilisasi permukaan dengan pencucian pada air mengalir dan deterjen sampai bersih, untuk sebagian besar tanaman dapat menggunakan alkohol 70% lalu desinfektan chlorox, HgCl₂ (untuk tanaman berkayu) dan lama sterilisasi tergantung pada jenis tanaman.

5. Penanaman pada Media

Penanaman dilakukan di dalam “laminar air flow cabinet” yang berada di ruang penanaman. Ruang tanam ini dilengkapi dengan blower, lamput TL dan UV selama ½ – 1 jam dalam keadaan ruang tertutup dan tidak diperkenankan masuk saat UV sedang menyala. Saat memulai pekerjaan lampu UV dimatikan, Blower dijalankan pada tekanan yang diinginkan kemudian lamput TL dinyalakan. Lampu TL berfungsi agar laminar terang dan memudahkan kerja, sedangkan blower merupakan tekanan angina sehingga bila mungkin ada kotoran sisa penanaman atau bakteri dan virus bias terdorong keluar.

6. Ruang Inkubasi

Ruang inkubasi (ruang pertumbuhan) dikondisikan sebaiknya sampai homogen, sehingga ruang kultur selalu dijaga dengan suhu 24 – 28^oC, dengan penga1uran AC dan pencahayaan. Pencahayaan dilakukan selama 16 jam.

7. Aklimatisasi

Plantlet (tanaman kecil hasil kultur jaringan) siap dipindahkan screen house di sini merupakan masa adaptasi plantlet dari lingkungan heterotrof ke autotrop dan lingkungan homogen ke lingkungan semi heterogen. Dan dalam kondisi steril ke aseptis sehingga merupakan kondisi yang kritis bagi plantlet. Oleh sebab itu perlu perawatan yang intensif untuk menangani pertumbuhan tanaman.

8. Pemindahan ke lapangan

Setelah 3 – 4 bulan di dalamn screen house dan tergantung kondisi dan kecepan tumbuh tanaman dapat dipindah ke lapangan. Di lapanganpun memerlukan sedikit naungan selama beberapa hari untuk mencegah dehidrasi yang berlebihan.

Keberhsilan dalam pelaksanaan ditentukan oleh beberapa faktor diantaranya :

Genotip dari tanaman itu sendiri, yakni sifat gen yang tidak sama pada setiap tanaman untuk membentuk tunas terutama pada saat subkultur pertama. Seperti pada pisang cavendish daya regenerasinya lebih cepat daripada pisang kapok, namun sering dengan bertambahnya subkultur biasanya daya regenerasi meningkat.

Umur eksplan, Dimana umur jaringan tanaman yang dijadikan eksplan berpengaruh terhadap potensi morfogenetiknya, umumnya eksplan yang diambil dari pucuk lebih lama menghasilkan tunas karena lebih lama mengalami pembelahan namun plantlet lebih steril. Sedangkan apabila eksplan berasal dari rodus (batang) plantlet memang lebih cepat daya tumbuhnya, namun plantlet lebih rentan terhadap serangan bakteri dan jamur.

ZPT, Jenis dan konsentrasi ZPT yang ditambahkan ke dalam media kultur sangat berpengaruh terhadap tuns yang dihasilkan. Untuk pembentukan tunas ZPT yang sering digunakan adalah BAP, sedangkan untuk pengakaran sering digunakan NAA dengan penambahan arang aktif 1 – 2,5 g/l. namun konsentrasi ZPT yang terlalu tinggi mengakibatkan tanaman tersebut mengalami abrasi yakni penyimpangan gen tanaman tersebut sehingg konsentrasi yang tepat merupakan penentu keberhasilan.

Lingkungan, Kondisi lingkungan yang mementukan keberhasilan pembiakan tanaman dengan kultur meliputi, cahaya, suhu serta kelembapan ruangan.

Secara umum intensitas cahaya yang optimum untuk tanaman pada kultur tahap inisiasi kultur adalah 0 – 1.000 lux, tahap multiplikasi 1.000 – 10.000 lux, tahap pengakaran 10.000 – 30.000 lux dan pada saat aklimatisasi 30.000 lux dalam pelaksanaannya pengaturan cahaya dapat dikendalikan dengan timer serta pengaturan rak inkubasi.

Suhu yang optimum untuk pertumbuhan plantlet di dalam ruang kultur berkisar antara 24 – 28^oC sehingga pada lab kultur diberikan AC dan pengukur suhu sehingga kita dapat dengan mudah mengethaui keadaan ruangan setiap saat.

Faktor eksternal lainnya, Faktor eksternal lainnya seperti pekerja lab. Alat dan bhan juga berpengaruh terhadap keberhasilan penanaman. Sehingga setiap pekerja yang akan bekerja di dalam lab sebaiknya dalam keadaan aseptis serta keahlian pekerja di bidang ini sangat diperlukan juga selain itu setiap alat dan bahan yang akan digunakan sebaiknya dalam keadaan steril sehingga sebelum menggunakannya kita melakukan sterilisasi sampai 121^oC selama 15 pst selama 15 menit. Ruang penanaman/temapt bekerj tidak tercemar bakteri, jamur atau virus lainnya yang dapat mengganggu pertumbuhan plantlet.

Teknik kultur jaringan merupakan perbanyakan tanaman secara vegetatif modern. Dimana dengan pengambilan organ tanaman seperti : akar, batang, daun, umbi, biji dapat menghasilkan bibit dalam jumlah besar dan seragam. Tanpa mengenal musim. Tidak memerlukan lahan yang luas karena diperbanyak di dalam botol dan memerlukan ruang tumbuh (inkubasi) yang tidak terlalu luas seperti lahan kebun, serta bebas dari virus, bakteri dan jamur karena ditumbuhkan secara steril, hal inilah yang mendorong banyak petani mengusahakan bibit secara kultur jaringan, naun belum banyak orang yang bias melakuakn metode ini. Oleh sebab itu memerlukan tenaga ahli di bidangnya.

PENUTUP

Kesimpulan

Dari pelaksanaan magang ini penulis bisa lebih memahami konsep perbanyakan tanaman yang penulis peroleh selama kuliah tahun pertama. Pada prinsipnya apa yang penulis peroleh di bangku kuliah dan apa yang dilakukan di Industri konsepnya tidak jauh berbeda, hanya saja penerapannya yang agak sedikit berbeda. Hal ini karena di industri bila melakukan perubahan dilakukan biasanya berdasarkan pengalaman kerja masing-masing industri. Sedangkan untuk dunia pendidikan memang diterapkan disiplin terhadap teori serta kurikulum yang dipelajari.

Pemahaman tentang kultur jaringan itu sendiri masih merupakan teori yang terbatas pada beberapa kelompok yang memang mendalami konsep ini sehingga tidak semua orang bias melakukan prosedur ini. Selain memang karena keterbatasan ahlinya, juga karena biaya awal yang cukup besar untuk melakukan metode ini, namun bagi pekerja lab kultur jaringan memang tidak selamanya berpatokan pada teori yang ada, karena mereka adalah praktisi yang memang setiap saat mencoba jenis baru dengan komposisi media yang mungkin saja bisa berbeda. Hal ini karena daya tumbuh atas penentu pertumbuhan tanaman ditentukan oleh komposisi medianya apakah bisa sesuai dengan yang diinginkan setiap tanaman sehingga kembali pada teori Totpotensi sel yang dikemukakan oleh Schwan dan Schelden, yakni setiap sel tumbuhan atau bagian kecil tanaman dapat tumbuh dan berkembang menjadi tanaman utuh asal dikondisikan pada lingkungan yang sesuai.

Saran

Seperti yang penulis kemukakan di atas bahwa perbanyakan bibit secara kultur jaringan di berbagai industri pada prinsipnya sama. Begitu pula pada dunia pendidikan, hanya saja pada dunia pendidikan lebih difokuskan pada teori dan ketepatan prosedur pelaksanaan yang ditentukan. Sedangkan untuk industri lebih dianjukan pada pelaksanaan pengalaman yang mereka peroleh. Sehingga banyak hal yang bisa lebih dipermudah, namun pernahkan kita mencoba mengkaji apakah ada atau tidak resiko yang mungkin terjadi pada hasil dari tanaman yang diperbanyak secara kultur jaringan, terutama tanaman yang merupakan bahan maknan, selain dari resiko kontaminasi, misalnya, apakah berpengaruh terhadap pertumbuhan, seperti halnya pula pada pemberian konsentrasi ZPT, penggunaan ZPT yang terlalu tinggi dapat menimbulkan abrasi pada tanaman (plantlet). Pernahkan kita meninjau kembali dimana terjadinya abrasi tersebut. Selain itu penggunaan ZPT yang terus menerus diberikan dapat mengakibatkan tanaman malah tidak tumbuh (untuk auksin) malah tetap, karena mengalami stagnasi pertumbuhannya. Apakah penggunaan ZPT yang berlebihan yang mungkin tidak bisa digunakan oleh tanaman mengakumulsi pada jaringan tanaman tertentu sehingga mungkin terjadinya kefatalan pada pertumbuhan selanjutnya seperti terjadinya abrasi pada buah tanaman, padahal tentunya pembuahan akan berlangsung setelah proses kultur selesai. Dan tanpa kita ketahui apa dan pada saat bagaimana ini bisa terjadi, dan dengan rentannya pertumbuhan plantlet saat aklimatisasi apakah tidak mengakibatkan tanaman itu menjadi ketergantungan pada perlakuan apa yang akan diberikan selanjutnya pada tanaman tersebut. Apakah tanaman akan kebal terhadap serangan opt yang ada di lingkungan luar, sedangkan kita ketahui pada perbanyakan kulturnya pekerja lab hanya mengendalikan pertumbuhan virus, bakteri dan jamur yang mungkin menyerang pada plantlet kecuali bila memang menggunakan transformasi genetika pada plantlet (penyisipan gen) namun di sini kita hanya melakukan perbanyakan vegetatif dengan metode kultur jaringan artinya hanya terbatas pada kultur jaringan yakni memperbanyak tanaman (bibit) melalui jaringan tanaman tertentu. Hal inilah yang menjadi kendala di benak penulis dan perlu kita kaji bersama.

PENGARUH KOMBINASI BA DAN GLUTAMIN TERHADAP PEMBENTUKAN ORGAN PADA PLANLET TANAMAN SEDAP MALAM

Nama                          :  Baiq Mutira sani

Pembimbing             : Ir. Atat Budiarta, MP

PROGRAM  ALIH JENJANG D3 ke D4 KULTUR JARINGAN TANAMAN KERJASAMA ITB-SEMOLEC-VEDCA

2009

RINGKASAN

Tanaman sedap malam merupakan tanaman yang sanat sulit dalam regenerasinya apalagi bibit yang umum digunakan untuk budidayana adalah umbi yang merupakan teknik perbanyakan vegetatif konvensional dimana tidak menutup kemungkinan bibit penyakit endemik akan selalu terbawa pada keturunannya, untuk itu dengan pengadaan bibit secara in vitro dapat memutus alur perkembangan yang berdampak kurang baik bagi pembudidayanya, setiap sel tanaman mampu tumbuh menjadi tanaman utuh yang sesuai dengan induknya bila diletakkan pada kondisi yang ssesuai dengan harapannya sehingga kaitannya dengan ini dibutuhkan media dengan komposisi serta keadaan yang sesua untuk pertumbuhannya, berdasarkan laporan penelitian Rostika dkk.2005 ada beberapa komponen yang tepat untuk multiplikasi pada organogenesis tanaman sedap malam yang menghasilkan tunas dan akar terbanyak pada MS+BA 7 ppm+glutamine 100 ppm, dengan perbandingan pada MS + BA 7 PPM dan DKW +TDZ 7 ppm +glutamine 100 ppm, sehingga selanjutnya akan dilakukan kombinasi terhadap media terbaik yang dihasilkan dengan kombinasi BA, 5 ppm, 7 ppm da 8 ppm dan glutamin 50 ppm, 100 ppm dan 125 ppm dan rancangan penelitian yang digunakan adalah rancangan acak lengkap faktorial dengan 2 kali ulangan dan indikator pengamatan dilakukan pada jumlah tunas, jumlah daun, panjang tanaman, pembentukan organ tanaman (pucuk, daun, batang, akar). Setelah diperoleh data maka akan dibandingan hasil terbaik dari kombinasi perlakuan.

1. PENDAHULUAN

1. Latar Belakang
2. Tujuan

Adapun tujuan pelaksanaan penelitian adalah

1.  Uji coba hasil  penelitian regenerasi organ secara in vitro terhadap tanaman sedap malam

2. Membandingkan konsentrasi pelaksanaan perlakuan terbaik pada penelitian sebelumnya

3. Menentukan konsentrasi yang baik untuk organogenesis sedap malam

1. Perumusan masalah

Tanaman sedap malam tergolong tanaman yang sangat lambat masa regenerasinya, dalam perbanyakan secara in vitro dari berbagai komposisi media (Rostika dkk) sangat lama mendapatkan tanaman yang aksenik saat inisiasi hal ini mungkin dikarenakan bulb merupakan bahan eksplan yang berasal dari dalam tanah yang memang sebagian besar telah di hinggapi oleh jamur dan bakteri, dalam masa regenerasinya sendiri di butuhkan media yang sesui untuk pertumbuhannya telah dilaporkan media multiplikasi yang sesuai untuk tanaman sedap malam dengan MS dan penambahan BA dan glutamin, untuk menguji penggunan media dalam penelitian ini dibuatkan kombinasi yang lebih tinggi dan lebih rendah dari media dimana diharapkan mendapatkan hasil penggunaan media yang optimal, pada kaidahnya makin tinggi konsentrasi media yang di gunakan maka makin cepat juga regenerasi suatu tumbuhan begitu juga sebaliknya, dalam hal ini akan di buktikan pengaruh kombinasi konsentrasi penggunaan media terhadap multiplikasi tanaman sedap malam.

2. METODOLOGI PENELITIAN

Penellitian dilakukan di laboratorim departemen prbenihan PPPPTK Pertanian Cinjur, mulai bulan Januari s.d  Juni 2009, tanaman  yang digunakan adalah tanaman sedap malam dengan bunga tipe ganda dari cipanas cianjur, pelaksanaannya diarahkan pada pembentukan multiplikasi tunas, sedangkan prosedur pelaksanaan organogenesisinya terbagi menjadi 4 tahap yakni 1. Inisiasi eksplan 2. Penggandaan tunas 3. Multipllikasi 4. Aklimatisasi. penelitian yang digunakan adalah metode rancangan acak lengkap  dengan 2 faktorial indikator pengamatan yang dilakukan adalah jumlah tunas, jumlah daun, panjang tanaman, pembentukan organ tanaman (pucuk, daun, batang, akar)

1. Inisiais eksplan

eksplan yang digunakan adalah dari bulb yang disterilkan menggunkan alkohol 70% selama 8 menit, HgCl₂ 0,2% selama 2 menit, Clorox 30% selama 7 menit, selanjutnya pada Clorox 20% selama 5 menit selanjutnya eksplan dapat diinisiasi adapun media untuk inisiasi menggunakan MS+ BA 3 ppm, Rostika dkk (Ballithi- jurnal hortikultura vol 15 no 4. 2005)

1. Penggandaan tunas

Setelah mendapatkan eksplan yang aseptis dari inisiasi  selanjutnya dipindahkan pada media induksi kalus, media yang diajukan MS+ BA 3 ppm+ TDZ 0,4 ppm Rostika dkk (Ballithi- jurnal hortikultura vol 15 no 4. 2005)

1. Multiplikasi lanjutan,

Telah dilaporkan rostika dkk(2005) penggunaan media MS+BA 7 ppm + glutamine 100 ppm dapat memacu pembentukan tunas dan akar, sehingga dalam hal ini penelitian akan diarahkan untuk membuat uji coba terhadap kombinasi MS dengan pemberian BA dan Glutamin, adapun kombinasi yang diberikan adalah:

Dari 2 faktor  dengan masing masing 4 kombinasi di peroleh 16 perlakuan sehingga ulangnnya:

(n-1) (k-1) ≥ 15

(n-1) (16-1) ≥ 15

(n-1) 15 ≥ 15

15n – 15  ≥ 15

n  ≥ 15 + 15

15n  ≥  30

n = 2 jadi diperoleh 2 kali ulangan

dari 2 kali ulangan dengan 16 perlakuan maka diperoleh 32 botol perlakuan

1. Aklimatisasi

Setelah terbentuk benih somatik selanjutnya dapat di akllimatisasi ke lingkungan luar (green house) adapun media yang diajukan adalah kompos

4. ANGGARAN BIAYA

Adapun anggaran biaya dalam pelaksanaan adalah sebagai berikut:

DAFTAR PUSTAKA

Balai Penelitian Tanaman Hias (jurnal penelitian hortikultura vol.4 no. 2 Th 2005)

Yusnita, Ir, MSc. 2003. Kultur Jaringan Cara memperbanyak tanaman secara efisien. Agromedia Pustaka

Teknik mIkroprapagasi Anyelir

1. Pendahuluan

LATAR BELAKANG

Tujuan

2.  SEKILAS TENTANG ANYELIR

Morfologi anyelir

Pembudidayaan anyelir

3. MEDIA TUMBUH PADA KULTUR ANYELIR

Larutan stok

Pembuatan media

4. SUMBER EKSPLAN ANYELIR

Seleksi bahan tanaman yang sesuai

Pemeliharaan tanaman induk sumber eksplan

5. INISIASI ANYELIR

6. PERBANYAKAN TUNAS MIKRO ANYELIR

7. INDUKSI AKAR PADA KULTUR ANYELIR

8. AKLIMATISASI

DAFTAR PUSTAKA

Untun Santoso, Fatimah Nursadi. 2002. Kultur Jaringan Tanaman. Universitas Muhammadiyah Malang.

Yusnita Ir, 2003. Kultur jaringan tanaman (cara memperbanyak tanaman secara efisien, agromedia pustaka

Atat budiarta Ir, 2004 . Dasar-dasar kultur jaringan tanaman,(diklat program D3)

Erna Martina, 2005.Laporan magang industry,perbanyakan tanaman anyelir melalui kultr jaringan tanaman, pusat pengembangan penataran guru pertanian cianjur

MIKROPROPAGASI ANYELIR
(Dhiantus Caryophillus)

Oleh: Baiq Mutiara Sani, A.Md

Budidaya anyelir di Indonesia pada umumnya dilakukan di dalam rumah naungan (shading house). Penggunaan rumah ini dimaksudkan untuk melindungi tanaman dari terpaan angin, perubahan suhu, terik matahari, curah hujan vana berlebihan dan hama pengganggu tanaman.

Sebelum bibit ditanam, dilakukan pengolahan tanah yang dilanjutkan dengan pembuatan bedengan. Empat unit shading house ukuran 210 m² memiliki bidang tanam masing-masing 120 m² sehingga seluruhnya terdapat 480 m² Dengan jarak tanam sekitar 25 cm x 25 cm maka dapat ditanam 9.640 tanaman. Keadaan tanah yang ideal untuk tanaman anyelir adalah tanah yang bertekstur liat berpasir, gembur, berdrainase baik dan mempunyai pH antara 5,5 – 6,7. Seminggu sebelum penanaman bibit, tanah diberi pupuk dasar yang berupa campuran pupuk ZA 75 gram, TSP 75 gram dan KCI 75 gram untuk setiap m² lahan.

Bibit anyelir umumnya masih didatangkan dari breder di luar negeri, namun demikian ada juga yang dikembangkan di dalam negeri oleh Balai Penelitian Departemen Pertanian. Bibit yang berasal dari luar negeri mempunyai warna dan bentuk yang menarik, tetapi petani harus membayar royalty kepada pemberi bibit, sedangkan yang bibitnya dari dalam negeri dapat diusahakan untuk dapat diperbanyak sendiri. Kondisi saat ini para petani lebih mengutamakan bibit dalam negeri karena tingginya royalty yang harus dibayar, sementara itu para konsumen, terutama para “florist” juga cenderung menggunakan bunga dari varietas dengan bibit lokal karena tersedia di pasar local.

1. PENDAHULUAN

a. latar Belakang

Dahulu, ketika manusia hidup berpindah – pindah, untuk memenuhi kebutuhan pangan mereka dengan mudah mencarinya di hutan. Tetapi setelah hidup menetap, mereka mulai bercocok tanam, dengan jumlah penduduk yang sudah demikian padat dan perkembangan ilmu serta teknologi yang demikian pesat, manusia harus berbuat sesuatu untuk memenuhi kebutuhan hidup yang diambil dari tanaman, baik secara langsung maupun tidak langsung. Manusia mengambil manfaat dari tanaman tidak hanya sebagai sumber bahan pangan, tetapi juga sebagai sumber untuk memenuhi kebutuhan dalam banyak hal, misalnya sebagai bahan sandang, bangunan, makanan ternak, keindahan, pencegah erosi, dan sebagainya (Mangoendidjojo, 2003).

Varietas unggul merupakan faktor utama yang menentukan tingginya produksi yang diperoleh bila persyaratan lain dipenuhi. Varietas unggul dapat diperoleh melalui pemuliaan tanaman. Suatu varietas unggul tidak selamanya akan menunjukkan keunggulannya, tetapi makin lama produksi akan makin menurun tergantung pada komposis genetiknya, dalam program mengembangkan pemuliaan tanaman maka pemulia tanaman terus mensuplai stok plasma nutfah yang beraneka ragam dalam pelestariannya sendiri pemeliharaan tanaman dilakukan dengan spectrum luas yang tersebar di seluruh dunia (zea mays, CIMMYT meksiko, ICA kolombia dsb).

Sekarang, dengan jumlah penduduk yang sudah demikian padat dan perkembangan ilmu serta teknologi yang demikian pesat, ditemukanlah bioteknologi di bidang pertanian khususnya agronomi yang sampai sekarang disebut dengna teknik kultur jaringan tanaman,

Kultur jaringan tanaman bermula pada 1665 dari penemuan “teori sel” kemudian berkembang dengan ditemukannya sifat totipotensi sel (Scleiden dan Schwann 1838) yang memelopori perkembangan selanjutnya mengenai teknik kultur jaringan tanaman)

Kultur jaringan tanaman merupakan teknik menumbuh-kembangkan baigan tanaman, baik berupa sel, jaringan, atau organ dalam kondisi aseptik secara in vitro. Teknik ini dicirikan oleh kondisi yang aseptik, penggunaan media kultur buatan dengan kandungan nutrisi lengkap dan ZPT (zat pengatur tumbuh), serta kondisi ruang kultur yang suhu dan pencahayaannya terkontrol.

Berdasarkan bagian tanaman yang dikulturkan, secara lebih spesifik terdapat beberapa tipe kultur, yaitu kultur kalus, kultur suspensi sel, kultur akar, kultur pucuk tunas, kultur embrio, kultur ovul, kultur anter dan kultur kuncup bunga. Namun, semua jenis kultur tersebut sering disebut dalam istilah umum, yaitu kultur jaringan.

Tanaman anyelir (Dhintus Coryophillus sp) di Indonesia merupakan bunga potong yang sampai saat ini bibit dengan varietas yang unggul masih didatangkan dari luar, hanya jenis lokal saja yang banyak dan mudah di bibitkan, diharapkan dengan melakukan pembibitan dengan teknik kultur jaringan tanaman kita tidak perlu lagi mengintroduksi terus menerus sehingga dapat menghemat biaya produksi.

B. Tujuan

Tujuan penulisan ini adalah menyediakan bahan ajar teori mengenai tehnik mikropropagasi khususnya untuk pembudidayaan tanaman anyelir, sehinggga diharapkan dengan membaca saja sudah dapat memahami dan melaksanakan pembibitan tanaman anyelir dengan teknik kultur jaringan tanaman.

1. SEKILAS TENTANG ANYELIR

Morfologi anyelir

Anyelir (Dhiantus caryophyllus sp) bunga Anyelir hampir menyamai bunga Mawar, dan juga merupakan salah satu bunga yang paling populer di dunia.

Tanaman ini merupakan tanaman herba dengan tinggi mencapai 0,5 m, tergolong class Magnoliopsida dengan akar tunggang. Daun letaknya berhadapan dengan bentuk lancet, jumlah kelopak bunga kelipatan enam yang bersifat hermafrodit. Bunga Anyelir kebanyakan berwarna merah muda, namun ada pula yang berwarna merah, putih, kuning dan hijau bentuknya bulat dengan komposisi beberapa bagian kelopak yang terpisah. Bunga ini tumbuh dan mekar di tiap tangkainya.

MEDIA TUMBUH PADA KULTUR ANYELIR

Larutan stok

Pembuatan media pada prinsipnya dilakukan dengan melarutkan semua komponen media dalam air, sesuai dengan konsentrasinya pada formulasi yang diinginkan. Namun, penimbangan satu per satu komponen media untuk setiap pembuatan media kultur adalah tidak praktis, dan hanya dapat dilakukan jika jumlah zatnya cukup besar untuk ditimbang, Masalah tersebut dapat diatasi dengan pembuatan larutan stok.

Menentukan jenis dan komponen larutan stok

Larutan stok adalah larutan berisi satu atau lebih komponen media yang konsentrasinya lebih tinggi dari pada konsentrasi komponen tersebut dalam formulasi media yang akan dibuat. Seperti yang telah dikatakan sebelumnya bahwa tujuannya adalah untuk mengefisienkan pelaksanaan pembuatan media sehingga tidak perlu menimbang bahan kimia berulang – ulang, larutan stok bisa dibuat dengan konsentrasi 10, 100 atau 1.000 kali lebih pekat dan sebagainya. Jika larutan stok sudah dibuat, pembuatan media dapat dilakukan dengan mengambil sejumlah larutan stok, sehingga konsentrsinya menjadi sesuai dengan yang terdapat dalam formulasi media yang dikehendaki.

Dalam membuat larutan stok, yang perlu diperhatikan adalah penyatuan beberapa komponen media sekaligus dalam suatu larutan stok harus mempertimbangkan kecocokan dan kestabilan sifat kimianya.

Unsur makro kebutuhan bahannya relatif banyak sehingga sebaiknya dibuat stok tunggal sedangkan untuk stok hara mikro dapat dicampurkan beberapa bahan dalam satu larutan stok tetapi harus mempertimbangkan kecocokan dari masing-masing komponen bahan kimia. Vitamin sebagai bahan organik umumnya mudah rusak karena panas yang tinggi juga bila terkena cahaya dan pada penyimpanannya sendiri terutama dalam larutan sehingga sebaiknya pembuatan stok ini dalam jumlah sedikit agar lebih cepat habis. Hormon tumbuh berpengaruh terhadap arah perkembangan planlet sehingga sering dikaitkan dengan hipotesa yang harus dijawab, oleh sebab itu stok ini harus dibuat terpisah.

Tabel. 1. Formulasi media MS (Murashige dan Skoog, 1962) Vitamin dan hormon tumbuh pada pengelompokan senyawa kimia dalam pembuatan larutan stok.

Menghitung kebutuhan larutan stok

Media yang kita gunakan adalah media MS karena komponen media ini cocok untuk berbagai jenis tanaman, sebelum membuat larutan stok terlebih dahulu yang kita lakukan adalah menghitung komponen nutrisi seperti;

Stok makro

NH₄NO₃, misalnya dibuat 10 kali maka senyawa NH₄NO₃ 1650 mg x 10 = 16500 mg sehingga penimbangan untuk stok 10 kali pemakaian adalah 16500 mg atau 16,5 g

KNO₃, misalnya dibuat 10 kali maka senyawa KNO₃ 1900 mg x 10 = 19000 mg sehingga penimbangan untuk stok 10 kali pemakaian adalah 19 g

CaCl₂.2H₂O, misalnya dibuat 10 kali maka senyawa CaCl₂.2H₂O 440 mg x 10 = 4400 mg sehingga penimbangan untuk stok 10 kali pemakaian adalah 4,4 g

MgSO₄.7H₂O, misalnya dibuat 10 kali maka senyawa MgSO₄.7H₂O 370 mg x 10 = 3700 mg sehingga penimbangan untuk stok 10 kali pemakaian adalah 3,7 g KH₂PO₄, misalnya dibuat 10 kali maka senyawa

KH₂PO₄ 170 mg x 10 = 1700 mg sehingga penimbangan untuk stok 10 kali pemakaian adalah 1,7 g

Stok mikro

Sebagai sumber unsur mikro kita gunakan 100 kali pemekatan maka kita dapat menimbang dengan jumlah sebagai berikut :

Kl 0,83 mg x 100 = 83 mg

H₃BO₃ 6,2 mg x 100 = 620 mg

Na₂MoO₄2H₂O 0,25 mg x 100 = 25 mg

CoCl₂.6H₂O 0,025 mg x 100 = 2,5 mg

Unsur mikro yang lain jumlahnya adalah sebagai berikut :

MnSO₄4H₂O 22,3 mg x 100 = 2230 mg

ZnSO₄.7H₂O 8,6 mg x 100 = 860 mg

CuSO₄.5H₂O 0,025 mg x 100 = 2,5 mg

untuk stok mikro lainnya kita buatkan pemekatan 10 kali adalah:

FeSO₄7H₂O 27,8 mg x 10 = 278 mg

Na-EDTA 37,3 mg x 10 = 373 mg

Stok vitamin

Untuk membuat vitamin dari media MS dimana dibutuhkan Niacin (nicotinic acid) 0,5 mg, Pyridoxine-HCl 0,5 mg, Thiamin-HCl 0,1 mg dan Glycine sebanyak 2,0 mg per liter media, Misalnya dibuat 100 kali

Menimbang bahan-bahan diatas sebanyak 100 kalinya, sebagai berikut:

Niacin (nicotinic acid) 50.0 mg

Pyridoxine-HCl 50.0 mg

Thiamin-HCl 10.0 mg

Glycine 20.0 mg

Stok myo-inositol karena kebutuhannya lebih banyak yakn 100 mg/l media sehingga dibuatkan sebagai stok vitamin sendiri, adapun kita buatkan dalam 10 kali pemekatan sehingga 100 mg x 10 = 1000 mg atau 1 g bahan

Stok hormon tumbuh

Untuk stok hormone tumbuh biasanya digunkaan dalam konversi 1mg/l, ppm dan Molar, sehingga mengenai berapa konsentrasi yang akan di gunakan itu sesuai selera yang akan membuat media itu sendiri adapun perhitungannya adalah:

mg/l untuk pemekatan 100 kali berarti yang ditimbang adalah 100 mg

ppm dimana 1 ppm = 1 mg/l berarti pemekatan 100 kali = 100 mg

10^-3M dimana 1 M = mol/l = Mr g /l misalnya sitokinin 1 M BAP dimana Mr BAP =225 berarti 1 M BAP = 225 g/l = 225000 mg/l atau 225000 ppm, sehingga ditemukan 10^-3M =225 ppm sehinggga kita dapat menimbang 225 mg BAP untuk membuat 1 M stok media, begitu pula seterusnya.

Membuat larutan stok

Setelah kita menimbang maka kita tinggal mengencerkan bahan kimia tersebut untuk kita jadikan larutan stok, untuk memudahkan dalam mengelompokkan larutan stok dapat kita golongkan masing masing komponen yang diencrkan dengan penamaan sebagai berikut:

Stok makro:

Stok (A) NH₄NO₃, kita encerkan dalam volume 100 ml. maka senyawa

NH₄NO₃ sebanyak 16.5 gram dimasukkan kedalam gelas piala 200 ml yang

telah diisi aquades sebanyak 70 ml dan selanjutnya diaduk hingga larut. Setelah

itu tuang dalam labu ukur dan tambahkan sejumlah aquades hingga volumenya

tepat 100 ml baru pindah ke dalam erlemeyer. Untuk setiap satu liter media

dibutuhkan stok ini 10 ml.

Stok (B). KNO_3, dalam volume 100 ml, KNO₃ sebanyak 19 gram kemudian dilarutkan kedalam gelas piala 200 ml yang telah diisi 70 ml aquades dan selanjutnya di aduk hingga rata. Setelah itu tuang dalam labu ukur dan tambahkan sejumlah aquades hingga volumenya tepat 100 ml baru pindah ke dalam erlemeyer. Untuk setiap 1 liter media di butuhkan stok ini 10 ml.

Stok (C) CaCl₂.2H₂O, diencerkan juga dalam volume 100 ml.CaCl₂.2H₂O sebanyak 4,4 gram kemudian dilarutkan dalam gelas piala 200 ml yang telah diisi 70 ml aquades dan selanjutnya di aduk hingga rata. Setelah itu tuang dalam labu ukur dan tambahkan sejumlah aquades hingga volumenya tepat 100 ml baru pindah ke dalam erlemeyer. Untuk tiap satu liter media dibutuhkan stok ini 10 ml.

Stok (D) MgSO₄.7H₂O dan KH₂PO₄, dibuat dalam volume 100 ml. MgSO_4.7H₂O sebanyak 3.7 gram dan KH₂PO₄ sebanyak 1.7 gram kemudian dilarutkan dalam gelas piala 100 ml dengan volume aquades 30 ml secara terpisah terlebih dahulu kemudian tuang dalam labu ukur satu persatu dan tambahkan sejumlah aquades hingga volimenya tepat 100 ml baru pindah kedalam erlemeyer. Untuk tiap satu liter media dibutuhkan stok ini 10 ml.

B.Stok Campuran

Stok mikro diperlukan dalam jumlah sedikit sehingga dapat dibuat sebagai stok campuran, adapun campuran yang digunakan kita bagi dalam 3 jenis larutan stok mikro sebagai berikut;

Stok (E), stok ini akan kita larutkan dalam 200 ml, pertama-tama senyawa Kl sebanyak 83 mg dilmasukkan dalam gelas piala 100 ml kemudian dilarutkan dalam 25 ml aquadest, H₃BO₃ sebanyak 620 mg dilmasukkan dalam gelas piala 100 ml kemudian dilarutkan dalam 25 ml aquadest, Na₂MoO₄2H₂O sebanyak 25 mg dilmasukkan dalam gelas piala 100 ml kemudian dilarutkan dalam 25 ml aquadest,CoCl₂.6H₂O sebanyak 2,5 mg dilmasukkan dalam gelas piala 100 ml kemudian dilarutkan dalam 25 ml aquadest, setelah semua bahan larut pada masing masing beker gelas kemudidan masukkan masing masing kedalam gelas ukur sampai tepat volume 200 ml kemudian dipindah kedalam erlemeyer. Untuk tiap satu liter media dibutuhkan stok ini 2 ml.

Stok (F), stok ini akan kita larutkan dalam 100 ml, pertama-tama senyawa MnSO₄4H₂O sebanyak 2,23 g dilmasukkan dalam gelas piala 100 ml kemudian dilarutkan dalam 25 ml aquadest, ZnSO₄.7H₂O sebanyak 860 mg dilmasukkan dalam gelas piala 100 ml kemudian dilarutkan dalam 25 ml aquadest, CuSO₄.5H₂O sebanyak 2,5 mg dilmasukkan dalam gelas piala 100 ml kemudian dilarutkan dalam 25 ml aquadest, setelah semua bahan larut pada masing masing beker gelas kemudian masukkan masing masing kedalam gelas ukur sampai tepat volume 100 ml kemudian dipindah kedalam erlemeyer. Untuk tiap satu liter media dibutuhkan stok ini 1 ml.

Stok (G), stok ini akan kita larutkan dalam 100 ml, FeSO₄.7H₂O sebanyak 278 mg dimasukkan kedalam beker gelas 100 ml kemudian dilarutkan dalam 25 ml aquadest, kemudian Na-EDTA sebanyak 373 mg kemudian dimasukkan kedalam beker gelas 100 ml dan dilarutkan dengan aquades 25 ml secara , untuk Na-EDTA agar cepat larut dibantu dengan pemanasan ringan, setelah larut kemudian campur dalam gelas ukur sampai volume 100 ml kemudian masukkan dalam botol gelap, setelah kedua larutan ini tercampur warnanya akan tampak kuning oranye, dan kita dapat mengambil 10 ml dari stok untuk per liter media.

C.Stok Vitamin

Stok ini akan kita larutkan dalam 100 ml, dimana vitamin yang telah ditimbang yakni Niacin (nicotinic acid) sebanyak 50.0 mg, Pyridoxine-HCl sebanyak 50.0 mg, Thiamin-HCl sebanyak 10.0 mg, Glycine sebanyak 20.0 mg. dimasukkan masing masing bahan dalam beker gelas dan dilarutkan dengan aquadest masing-masing 10 ml, setelah larut tuangkan satu persatu dalam gelas ukur kemudian tera sampai volumenya 100 ml. Satu liter media hanya memerlakan sebanyak1 ml dari larutan stok vitamin.

Karena Myo-inositol yang dibutuhkan dalam media MS dan kebutuhannya relatif lebih besar di banding yang lain, maka dapat saja setiap membuat media baru menimbang atau dapat juga dibuat stok tersendiri. Bila ingin dijadikan stok maka dari penimbangan dengan pemekatan 10 kali tadi akan buat stok dalam 100 ml aquadest, maka my- indositol tersebut kemudian kita masukkan dalam gelas ukur 100 ml kemudian dilarutkan dalam 50 ml aquadest setelah larut kemudian di tera dalam gelas ukur sampai 100 ml, dan dapat diambil dalam stok ini 10 ml untuk 1 liter media

D.Stok Hormon Tumbuh

Membuat larutan stok zat pengatur tumbuh sedikit berbeda dengan membuat larutan stok hara atau vitamin yang mudah larut hanya dengan aquadest. Untuk zat pengatur tumbuh diperlukan asam atau basa dan kadang pemanasan sebagai cara mempercepat larutnya bahan. Kalau zat pengatur tumbuhnya bersifat asam maka pelarutnya basa (NaOH 1 N) misalnya : IAA, NAA, IBA, dan golongan auksin seperti 2,4-D lebih mudah dengan menggunakan alkohol 95 %. sedangkan bila basa maka pelarutnya adalah asam (HCl 1N) misalnya dari golongan sitokinin. (Zeatin, BA, 2-iP, IBA, Kinetin

Untuk Larutan Stok Auksin (IAA, NAA,IBA,2,4-D).

Menimbang bahan sebanyak 100 mg, kemudian dimasukkan kesalam gelas piala yang di beri aquades sedikit. Teteskan sedikit demi sedikit NaOH 1 N ke dalam gelas tadi sambil dikocok sehingga zat pengatur tumbuh larut merata.

Tambahkan aquadest hingga volume mendekati 70 ml, di kocok kembali kemudian tuangkan kedalam geas ukur.

Bilas gelas piala dengan aquadest sedikit demi sedikit hingga bersih, selanjutnya tambahkan lagi aquades kedalam labu ukur hingga volume tepat 100 ml.

Pindahkan larutan tersebut kedalam erlemeyer 100 ml.

Penggunaannya, misalnya kedalam 1 liter media akan ditambahkan zat pengatur tumbuh sejumlah 1 mg atau 1 ppm, maka hanya dibutuhkan 1 ml saja dari larutan stok zat pengatur tumbuh. Bila 5 ppm per liter media maka dibutuhkan 5 ml, demikian seterusnya.

Untuk Larutan Stok Sitokinin (Zeatin,BA,2-iP,PBA,Kinetin)

Menimbang bahan sebanyak 100 mg, kemudian masukkan kedalam gelas piala yang diberi aquadest 50 ml. teteskan sedikit demi sedikit HCL 1 N kedalam gelas tadi sambil dipanaskan dan dikocok (menggunakan hot plate stirrer) sehingga zat pengtur tumbuh larut merata.

Tambahkan aquades hingga volume mendekati 70 ml, di kocok kembali hingga merata kemudian tuangkan kedalam labu ukur.

Bilas gelas piala dengan aquades sedikit demi sedikit hingga bersih, selanjutnya tambahkan aquades kedalam labu ukur hingga volume tepat 100 ml.

Pindahkan larutan tersebut kedalam erlemeyer 100ml, tutup rapat denga alumminium foil, beri label dan kemudian simpan dialmari es.

Penggunaan nya, misalnya kedalam 1 liter media akan ditambahkan zat pengatur tumbuh sejumlah 2 mg atau 2 ppm, maka hanya dibutuhkan 2 ml saja dari larutan stok zat pengatur tumbuh. Bila diperluka 8 ppm per liter media maka dibutuhkan 8 ml, demikian seterusnya.

E.Menyimpan larutan stok

Adapun kita dapat melakukan penyimpanan larutan stok didalam lemari es adapun tahapan yang kita lakukan setelah membuat larutan stok tadi untuk disimpan adalah sebagai berikut:

Larutan stok yang telah di buat tadi di tutup dengan alluminnium voil berikan label berdasarkan kode label tadi jangan sampai keliru, dalam label di berikan kode tanggal pembuatan jenis stok, kepekatan dan dosis pengambilan per liter media untuk.

Selanjutnya dapat langsung disimpan dalam lemari es. Dan dapat di gunakan sewaktu kita akan membuat media sehingga tidak perlu melakukan penimbangan bahan kimia.

Sebelum menggunakan larutan stok sebaiknya selalu di periksa apakah larutan stok masih layak digunakan atau tidak, misalnya bila terdapat lender mengapung berarti stok tersebut telah tercemar bakteri dan bila terlihat seperti hifa berarti stok tersebut telah tercemar jamur dan stok seperti ini tidak layak untuk di gunakan lagi.

b.Pembuatan media

Setelah pembuatan stok kita dapat langsung membuat media prinsipnya pelaksanaannya adalah dengan mengambil komposisi stok A, B, C, D, E, F, vitamin dan ZPT dengan dosis per liter kebutuhan serta dengan menambahkann gula dan agar kemudian pengukuran pH, kisaran pH yang optimal adalah 5,6-5,8 apabila pH terlalu tinggi dapat ditambahkan HCl dan apabila pH terlalu rendah dapat ditambahkan NaOH, selanjutnya dilakukan pemanasan sampai semua komponen larut selanjutnya dilakukan sterilisasi pada autoklaf dengan suhu ± 121^oC dengan tekanan 15 psi selama 15 menit. Sumber kontaminasi juga sangat mempengaruhi waktu sterilisasi, dalam satu genus bakteri ketahanan terhadap panasnyapun berbeda. Untuk bacillus mempunyai rentang suhu yang mematikan antara 120^OC -180^OC selama 40-180 menit, meskipun demikian akhirnya akan kembali pada materi yang akan di sterilkan seandainya kontaminasi sangat parah dan sering terjadi maka dapat menggunakan rentang maksimal untuk peralatan kultur dalam sterilissasinya.

c.Penyimpanan media

Media setelah disterilisasi dapat di simpan dalam ruang penyimpanan media, media sebaiknya digunakan setelah 3-5 hari penyimpanan hal ini untuk menghindari terjadinya kontaminasi pada bahan kultur yang diakibatkan oleh media yang terkontaminasi, gejala kontaminasi pada media dapat ditandai misalnya dengan perubahan warna pada media dari wujud sebenarnya dimana apabila kontaminan tampak seperti berlendir berarti terserang bakteri sedangkan apabila tampak seperti hiva ataupun serat-serat halus berarti diserang oleh jamur.

SUMBER EKSPLAN ANYELIR

Seleksi bahan tanaman yang sesuai

Seleksi bahan tanam ini bertujuan agar pelaksanaan mikropropagasi yang dilakukan bukan semata mata hanya melakukan perbanyakan tunas mikro, tetapi penggunaan bahan tanam dari tanaman induk yang komersial dan diminati banyak konsumen sehingga aspek ini juga harus diperhatikan jenis, spesies, varietas harus jelas, oleh karena itu sebaiknya kita menggunakan tanaman induk dengan kualitas dan kuantitas yang baik dari tetua dengan varietas yang unggul dan banyak diminati konsumen, kondisi tanaman sumber eksplan yang sehat dan petumbuhannya normal kemungkinan besar akan menghasilkan kultur yang baik dan berhasil.

Pemeliharaan tanaman induk sumber eksplan

Setelah memilih tanaman induk selanjutnya kita dapat melakukan pemeliharaan tanaman induk dalam rumah naungan (shading house). Penggunaan rumah ini dimaksudkan untuk melindungi tanaman dari terpaan angin, perubahan suhu, terik matahari, curah hujan vana berlebihan dan hama pengganggu tanaman.

Tanaman anyelir dalam rumah naungan kita pelihara untuk menghindari kontaminasi yang berlebihan pada saat di jadikan sebagai sumber eksplan kultur, pemeliharaan disini dapat dilakukan 1-4 minggu sebelum pengambilan eksplan tergantung jenis dan kondisi tanaman induk yang akan digunakan, dalam pelaksanaan dapat dilakukan seperti pada umumnya pemeliharaan tanaman akan tetapi karena akan digunakan sebagai bahan kultur maka kita tidak disarankan untuk memicu pertumbuhan generative dari tanaman induk, dan yang harus kita perhatikan adalah terkendalinya tanaman dari hama serta serangan penyakit baik dari bakteri ataupun jamur

INISIASI ANYELIR

Inisiasi merupakan tahap penanaman bahan tanam (ekplan) dari lingkungan ekternal ke dalam labolatorium, tujuan utama tahap ini adalah mengusahakan kultur yang aseptik atau aksenik. Aseptik berarti bebas dari mikroorganisme, sedangkan aksenik berarti bebas dari mikroorganisme yang tidak diinginkan. Untuk mendapatkan kultur yang besih dari kontaminasi, eksplan harus diterilisasi. Sterilisasi merupakan upaya untuk menghilangkan kontaminan mikroorganisme yang menempel di permukaan eksplan. Beberapa bahan kimia yang dapat digunakan untuk mensterilkan permukaan eksplan adalah NaCL, CaOCl₂, etanol dan HgCl₂.

Pengambilan eksplan anyelir

Tujuan kultur jaringan adalah untuk mengontrol kondisi dimana eksplan yang dikulturkan dapat tumbuh sesuai arah yang diinginkan. Pertumbuhan organ, jaringan, baik pada kultur maupun pada tanaman biasa, ditentukan oleh kondisi fisiologis pada jaringan. Respon tanaman terhadap perubahan pada kondisi pertumbuhan harus dimediasi oleh perubahan fisiologis pada jaringan. ini berarti bahwa kondisi yang tepat diperlukan untuk memungkinkan respon pertumbuhan tertentu pada kultur tergantung pada status fisiologis bahan tanaman. Status fisiologis tanaman bervariasi secara alami karena tanaman tumbuh pada tahap yang berbeda dan kondisi berbeda atau musim yang berbeda. Kita dapat mengontrol beberapa perubahan ini baik secara tidak langsung dengan mengontrol lingkungan, seperti suhu, sinar, suplai air, supai hara atau secara langsung dengan memberikan zat pengatur tumbuh

Bagian tanaman tunas atau ruas/node paling sering digunakan, tapi bagian lain juga dapat digunakan tergantung pada spesies dan tujuan yang diinginkan semakin kecil eksplan, semakin kecil kemungkinan menularkan penyakit endogenus atau mengintroduksikan variasi akibat mutasi genetis Sebaliknya, eksplan yang lebih kecil lebih mudah rusak pada saat penanganan dan lebih rentan terhadap kegagalan pada kultur awal beberapa spesies atau kultivar lebih mudah dikulturkan dibandingkan yang lain; secara umum, tanaman yang mudah diperbanyak secara tradisional dengan stek, biasanya lebih mudah dikulturkan ujung tunas dan daun yang baru tumbuh adalah bahan eksplan terbaik. Hindari menggunakan bahan yang kontak langsung dengan tanah dimana kemungkinan infestasi penyakit sangat besar pilihlah jaringan yang sehat

Pelaksanaan inisiasi anyelir

Setelah eksplan diambil dari tanaman induk selanjutnya dapat di inisiasi pada LAFC (laminar air flow cabinet) namun kita harus sterilisasi ekplan terlebih dahulu, strilisasi eksplan dilakukan 2 tahap di luar laminar dan di dalam laminar. Di luar laminar dapat dilakukan dengan deterjen 2 g/liter, benlate 2 gr/lt, dan agrimicin 2 gr/lt kemudian di dalam LAFC dapat dilakukan sterilisasi dengan Natrium hipoklorit dengan konsentrasi 15% selama 4-5 menit, 10% selama 8-10 menit dan 5% selama 15 menit, Sterilisasi ruang kultur dan LAFC yang paling baik adalah dilakukan dengan penggunaan sinar ultraviolet (UV). Waktu sterilisasi bervariasi tergantung dari ukuran ruang transfer itu sendiri dan harus dilakukan apabila tidak ada kegiatan dalam ruang tersebut. Radiasi UV sangat berbahaya bagi mata dan kulit.

Pelaksanaan penanaman ekplan sendiri dilakukan dengan mengambil potongan 1-2 nodus dapat juga mengambil bagian pucuknya,menggunakan medi MS tanpa hormon tumbuh hal ini dilakukan untuk mendapatkan eksplan yang steril, dengan jumlah 4-5 potongan ekplan per botolnya. Setelah penanaman dilakukan maka botol yang telah berisi ekplan diberi label dan harus menyertakan jenis ekplan dan varietas ekplan, tanggal penanaman dan bila kode lain bila ingin di tambahkan.

Inkubasi

Pemeliharaan eksplan dan planlet dalam botol kultur dilakukan pada ruang pertumbuhan (inkubasi) yang dikondisikan homogen dengan suhu berkisar antara 24-28^oC yang diatur dengan air conditioner (AC) dengan pencahayaan ± 16 jam dan tergantung pada kondisi eksplan yang ingin di berikan.

PERBANYAKAN TUNAS MIKRO ANYELIR

Pada tahap ini perbanyakan tunas dirangsang, umumnya dengan mendorong percabangan tunas lateral atau merangsang pembentukan tunas adventif. Pada kultur anyelir di PT. Inggu Laut Abadi menggunakan BAP sebagai sitokininnya. Eksplan yang hidup dan tidak terkontaminasi (aseptik) dari tahap inisiasi kultur dipindahkan atau disubkulturkan ke media yang mengandung sitokinin. Propagul yang dihasilkan dalam jumlah berlipat disubkulturkan terus secara berulang-ulang sampai dicapai jumlah propagul yang diharapkan. Setelah itu, tunas mikro yang dihasilkan dapat diakarkan dan diakimatisasi.

Dua hal penting yang harus diperhatikan dalam tahap ini adalah ratio perbanyakan dan aberasi genetik. Ratio perbanyakan dapat dilihat dari jumlah tunas per eksplan. Ratio perbanyakan pada setiap periode kultur umumnya meningkat dengan meningkatnya konsentrasi sitokinin atau dengan menggunakan jenis sitokinin yang lebih kuat. Namun, ratio yang terlalu tinggi akan berisiko tinggi untuk menghasilkan tanaman off-type dan terjadinya vitrifikasi.

Vitrifikasi adalah abnormalitas pada tanaman yang dikulturkan secara in vitro yang ditandai dengan kandungan air jaringan terlalu tinggi, sukulensi, atau transluceny (tembus cahaya). Tanaman yang mengalami vitrifikasi tampak lemah dan tampak seperti tembus cahaya karena kandungan airnya terlalu tinggi. Gejala vitrifikasi sering disebabkan oleh terlalu tingginya konsentrasi sitokinin, terlalu rendahnya konsentrasi agar, dan tingginya konsentrasi ion ammonium. Karena itu, pilihan yang terbaik bukan pada perlakuakn yang menghasilkan tunas terbanyak, tetapi ratio perbanyakan yang cukup tinggi dengan kualitas tunas yang terbaik, dipandang dari segi kestabilan genetik dan vigor tunasnya.

INDUKSI AKAR

Tunas-tunas yang dihasilkan pada tahap multipliksi dipindahkan ke media lain untuk pemanjangan tunas. Media untuk pemanjangan tunas mengandung sitokinin sangat rendah atau tanpa sitokinin yang pernah dilakukan pada PT Inggu Laut Abadi induksi akar diberikan tanpa sitokinin namun dengan Auksin jenis NAA bahkan juga tanpa auksin. Tunas tersebut dapat dipindahkan secara individu atau berkelompok. Pemanjangan tunas secara berkelompok lebih ekonomis daripada secara individu. Setelah tumbuh cukup panjang dan menjadi tanaman lengkap (plantlet) selanjutnya dapat diaklimatisasi.

AKLIMATISASI

Pada tahap ini, plantlet atau tunas mikro dipindahkan ke lingkungan di luar botol seperti rumah kaca, rumah platik atau screenhouse (rumah kaca kedap serangga). Proses ini disebut aklimatisasi. Aklimatisasi adalah pengondisian plantlet atau tunas mikro (jika pengakaran dilakukan secara ex vitro) di lingkungan baru di luar botol, dengan media tumbuh yang keadaan nutrisinya tidak seimbang dimana planlet diharapkan dapat terus bertahan dan tumbuh menjadi bibit yang siap ditanam di lapang.

Tahap ini merupakan tahap kritis karena kondisi iklim mikro di rumha kaca, rumah plastik, rumah bibit dan lapangan sangat jauh berbeda dengan kondisi iklim miko di dalam botol. Kondisi di luar botol berkelembapan nisbi jauh lebih rendah, tidak aseptik dan tingkat intensitas cahayanya jauh lebih tinggi daripada kondisi di dalam botol. Plantlet atau tunas mikro lebih bersifat heterotrik karena sudah terbiasa tumbuh dalam kondisi berkelmbapan sangat tinggi, aseptik serta suplai hara mineral dan sumber energi berkecukupan.

Di samping itu, tanaman tersebut memperlihatkan beberapa gejala ketidaknormalan, seperti bersifat sangat sukulen, lapisan kutikula tipis, dan jaringan vaskulernya tidak berkembang sempurna, morfologi daun abnormal dengan tidak berfungsinya stomata sebagaimana mestinya, struktur mesofil berubah, dan aktivitas fotosintesis sangat rendah. Dengan karakteristik seperti itu, plantlet atau tunas mikro mudah menjadi layu atau kering jika dipindahkan ke kondisi eksternal secara tiba-tiba. Karena itu, plantlet atau tunas mikro tersebut perlu diadaptasikan di lingkungan baru yang lebih keras. Dengan perkataan lain, plantlet atau tunas mikro perlu diaklimatisasi.

Aklimatisasi dilakukan dengan memindahkan plantlet atau tunas mikro ke media aklimatisasi dengan intensitas cahaya rendah dan kelembapan nisbi tinggi. Secara berangsur-angsur kelembapannya diturunkan dan intensitas cahayanya dinaikkan. Cara yang paling mudah untuk mengaklimatisasi plantlet adalah dengan memindahkannya ke bak aklimatisasi dengan media campuran tanah, pasir, dan kompos, kemudian disemprot dengan air dan disungkup plastik. Media aklimatisasi yang dipakai bisa juga berupa campuran media lain yang cocok

Lembar kerja

Pembuatan larutan stok

A.Judul : Pembuatan stok media dasar MS (100x Pemekatan), Vitamin dan Hormon tumbuh.

B. Alat dan bahan

Alat:

1. timbangan analitis

2. hot plate dan magnetic stirrer

3. beker glass 100 ml. 200 ml,

4. pipet tetes

5. gelas ukur

6. elenmeyer 100 ml

7. sendok steinles

- Bahan: 1.kertas timbang

2. aluminium Foil

3. kertas label

4. aquadest

5. NaOH 1 N

6. HCl 1 N

Keselamatan kerja

Gunakanlah jas labolatorium saat melakukan kegiatan di dalam labolatorium!

Mengambil bahan kimia menggunakan sendok!

Tidak mencampur bahan kimia tanpa petunjuk teknisi labolatorium atau perosedur kerja!

Gubakan alat elektronik berdasarkan petunjuk kerja!

Apabila terdapat kesulitan bertanyalah pada teknisi praktikum

Langkah kerja

Timbang masing-masing bahan kimia makro, mikro vitamin dan hormon tumbuh

Untuk makro 10 kali pemekatan maka timbang masing masing kompon

Mikro dengan 100 kali pemekatan

Stok zat besi dengan 10 kali pemekatan

FeSO₄7H₂O = 278 mg

Na-EDTA = 373 mg

Stok vitamin dengan 100 kali pemekatan

Niacin (nicotinic acid) 50.0 mg

Pyridoxine-HCl 50.0 mg

Thiamin-HCl 10.0 mg

Glycine 20.0 mg

Stok hormon tumbuh 100 ppm

Sitokinin (BAP) = 100 mg

Auksin (NAA) = 100 mg

Kemudian larutkan bahan

Makro, Stok (A)NH₄NO₃, dalam volume 100 ml

masukkan kedalam beker gelas 200 ml yang telah diisi aquades sebanyak 70 ml

diaduk hingga larut kemudian tuang dalam labu ukur dan tambahkan sejumlah aquades hingga volumenya tepat 100 ml

Pindahkan ke dalam erlemeyer tutup rapat dengan alluminium foil

Beri label dan simpan dalam lemari es

Begitu pula selanjutnya dengan Stok (B)KNO₃, Stok (C) CaCl₂.2H₂Oa Stok (D) MgSO₄.7H₂O dan KH₂PO₄,

Mikro, Stok (E),

Pertama-tama Kl sebanyak 83 mg dilmasukkan dalam gelas piala 100 ml larutkan dalam 25 ml aquadest

H₃BO₃ sebanyak 620 mg dilmasukkan dalam gelas piala 100 ml larutkan dalam 25 ml aquadest

Na₂MoO₄2H₂O sebanyak 25 mg dilmasukkan dalam gelas piala 100 ml larutkan dalam 25 ml aquadest,

Cl₂.6H₂O sebanyak 2,5 mg dilmasukkan dalam gelas piala 100 ml kemudian dilarutkan dalam 25 ml aquadest,

Setelah semua bahan larut pada masing masing beker gelas kemudidan masukkan masing masing kedalam gelas ukur sampai tepat volume 200 ml

Kemudian dipindah kedalam erlemeyer dan tutup dengan alluminium foil

Beri label dan simpan dlam lemari es

begitu pula prosedur untuk membuat stok media mikro F (MnSO₄4H₂O, ZnSO₄.7H₂O, CuSO₄.5H₂O).

Stok zat besi (G), di buat dengan melarutkan FeSO₄7H₂O dalam 25 ml aquadest

Na-EDTA sebanyak 373 mg kemudian dimasukkan kedalam beker gelas 100 ml dan dilarutkan dengan aquades 25 ml, untuk Na-EDTA agar cepat larut dibantu dengan pemanasan ringan,

Setelah larut kemudian campur dalam gelas ukur sampai volume 100 ml kemudian masukkan dalam botol gelap, setelah kedua larutan ini tercampur warnanya akan tampak kuning oranye,

Kemudian berikan label dan simpan dalam lemari es

Stok vitamin: Niacin (nicotinic acid), Pyridoxine-HCl, Thiamin-HCl, Glycine dalam 100 ml.

Masukkan masing masing bahan dalam beker gelas secara terpisah

larutkan dengan aquadest masing-masing 10 ml, setelah larut tuangkan satu persatu dalam gelas ukur

kemudian tera sampai volumenya 100 ml.

masukkan ke dalam elenmeyer 100 ml kemudian di tutup dengan aluminium foil

beri label dan simpan dalam lemari es

untuk Myo- inositol tekniknya juga sama dengan pembuatan vitamin di atas

Stok hormon tumbuh

Masukkan BAP yang telah di timbang ke dalam beker gelas,

teteskan sedikit demi seddikit HCl 1 N sampai benar benar larut (tampak jernih

Kemudian tambahkan aquadest dan tera sampai 100 ml, kemudian pindahkan ke dalam elenmeyer

Tutup rapat dengan aluminium foil

Beri label dan simpan didalam lemari es

Untuk uksin tekniknya sama saja hanya saja untuk mempermudah larutnya dapat menggunakan NaOH 1 N serta dengan sedikit pemanasan

Pembuatan media

Judul : Pembuatan Media MS₀ 1 lt

Alat dan bahan

Alat:

1. Hot plate dan magnetic stirrer

2. Gelas ukur 1 liter

3. Pipet Volum 1 ml, dan 10 ml

4. pipet tetes

5. elenmeyer 1000 ml

6. pH meter

- Bahan:

1. Aquades

2. Stok A,B,C,D,E.F, Vitamin, Gula dan Agar

3. kertas label

4. NaOH 1 N

5. HCl 1 N

Keselamatan kerja

Gunakanlah jas labolatorium saat melakukan kegiatan di dalam labolatorium!

Tidak mencampur bahan kimia tanpa petunjuk teknisi labolatorium atau perosedur kerja!

Gubakan alat alat labolatorium berdasarkan petunjuk kerja!

Apabila terdapat kesulitan bertanyalah pada teknisi praktikum

Langkah kerja

Menyiapkan alat dan bahan yang diperlukan.

menimbang gula 30 g/l agar 7 – 8 g/l dan Mio-inositol 0,1 g/l.(bila tidak membuat stok Mio-inositol)

mengambil larutan stok A, B, C, D, E dan F satu persatu dengan ukurannya masing-masing, dan vitamin yang diperlukan.

tuang agar, mio-inositol dan gula ke dalam elenmeyer, untuk memasak media setelah menuang komposisi A, B, C, D, E, F vitamin setelah diterakan.

Ukur pH yang ditentukan, 5,6 – 5,8 apabila pH terlau tinggi (basa) ditambahkan HCl, sedangkan bila pH rendah (asam) ditambahkan NaOH.

Masak media sampai homogeny diatas hot plate dengan magnetic stirrer sebagai pengaduknya.

setelah mendidih kemudian media dituang di dalam botol kultur ± 30 ml/botol kemudian disterilisasi pada autoklaf dengan suhu ± 121^oC dengan tekanan 15 psi selama 15 menit.

Setelah steril, botol diberi label dan media dapat disimpan dan siap digunakan bila diperlukan

LEMBAR KERJA 2

Memilih dan memelihara tanaman induk sumber eksplan

Sebelum memilih kriteria tanaman induk sumber eksplan terlebih dahulu kita tetapkan kriteria yang dipilih antara lain:

Sehat, verietas yang banyak diminati dengan harga yang ekonomis, warna bunga sudah diketahui,

Alat dan bahan

Adapun alat dan bahan yang diperlukan adalah: bunga yang telah teridentifikasi dengan beberapa varietas sebagai calon tetua, rumah naungan, pupuk, gunting stek, fungisida dan bakterisida

Keselamatan kerja

Lakukan praktikum sesuai dengan prosedur kerja

Apabila terdapat kesulitan bertanyalah pada teknisi praktikum

Langkah kerja

Siapkan alat dan bahan yang diperlukan

Golong-golongkan tetua dengan jenis yang paling diminati sampai yang kurang di cari

Ambil satu jenis tanaman yang akan di jadikan tanaman induk sumber eksplan berdasarkan pertimbangan yang terbaik

Peliharalah di dalam rumah naungan

Beri pengairan, pemupukan, serta peraawatan dengan menyemprotan bakterisida dan fungisida

Pangkas tunas apikal untuk memicu pertumbuhan tunas aksilar dan mengurangi pertumbuhan generatif

Amati perubahannya, apabila telah tampak sehat dapat dilakukan pengambilan eksplan.

LEMBAR KERJA 3

Judul : Inisiasi anyelir

Alat dan bahan

Alat:

1. Pengaduk (pada hot plate dan magnetic stirrer)

2. gelas ukur 100 ml / 1000 ml

3. timbangan analitik

4. sendok stanles

5. elenmeyer 100 ml, 1000 ml

6. alat diseksi (pinset, scalpel+mata pisau,)

7. ruang tanam dengan LAFC

8. kaca tanam

9. lampu Bunsen

10. petridish

11. ember untuk sampah

- Bahan: 1. Air, aquades, aquadest steril

2. deterjen

3. NaOCL (Clorox)

4. . potongan calon eksplan

5. alcohol, 70%, 90%

6 kertas label

7. kertas steril

8. media MSo

9. tissue

10. kertas timbangan

Keselamatan kerja

Gunakanlah jas labolatorium saat melakukan kegiatan di dalam labolatorium!

2.Tidak mencampur bahan kimia tanpa petunjuk teknisi labolatorium atau perosedur kerja!

3Gunakan alat alat labolatorium berdasarkan petunjuk kerja!

4.Apabila terdapat kesulitan bertanyalah pada teknisi praktikum

Langkah kerja

1.Menyiapkan alat dan bahan yang diperlukan.

Timbang deterjen 500 mg

Larutkan bahan diatas ke dalam 250 ml aquadest untuk deterjen dapat menggunakan air

Bersihkan potongan calon eksplan, kurangi bagian daun (jangan di pangkas bagian daun samapai pangkal daun)

Cuci dengan air mengalir

Masukkan dalam larutan deterjen sambil di aduk dengan stirer selama 3’

Bilas dengan aquadest sapai 3 kali (cukup dicelupkan saja)

sukkan potongan tanaman ke dalam aquadest steril bawa ke ruang tanam (terlebih dahulu ruang tanam dan LACF telah di sterilisasi dengan lampu UV ± 1 jam)

Rendam eksplan dalam alcohol 70% selama 10 menit sambil di adik selanjutnya bilas dengan aquadest steril

Buat larutan clorox 15%, 10% dan 5%

Rendam eksplan dalam larutan Clorox selama 15% selama 5 menit, 10% selama 10 menit dan 5% selama 15 menit (setiap penggantian konsentrasi potongan eksplan di celupkan ke dalam aquadest steril)

Eksplan siap di tanam

Siapkan alat diseksi dan alat tanam (kaca taman, media, scalpel+mata pisau, pinset,botol pembilas dengan alcohol 90%, tissue, kertas steril, cawan petri)

Potong – potong potongan eksplan yang bekas luka dari proses sterilisasi tadi,

Potong bagian yang akan di tanam 1-2 nodus per potongan,

Tanam pada media tanam dengan jumlah 4-5 eksplan/botol

Keluarkan dari LAFC, beri label, jenis tanaman, varietas, tanggal tanam serta keterangan lain yang ingin ditambahkan bila ada.

Inkubasikan dalam ruang tanam dan amati perubahannya.

LEMBAR KERJA 4

Judul : multiplikasi anyelir

Alat dan bahan

Alat:

1. ruang tanam dengan LAFC

2. alat diseksi (pinset, scalpel+mata pisau,)

3. kaca tanam

4. lampu Bunsen

5. petridish

6. ember untuk sampah

Bahan

1. media MS+BAP 0,5-1ppm

2. planlet yang akan di cutting

3. kertas steril

4. tissue

5. kertas label

Keselamatan kerja

\Gunakanlah jas labolatorium saat melakukan kegiatan di dalam labolatorium!

Tidak mencampur bahan kimia tanpa petunjuk teknisi labolatorium atau perosedur kerja!

Gunakan alat alat labolatorium berdasarkan petunjuk kerja!

Apabila terdapat kesulitan bertanyalah pada teknisi praktikum

Langkah kerja

Menyiapkan alat dan bahan yang diperlukan.

Semprotkan tangan terlebih dahulu dengan alcohol 70% sebelum bekerja

Keluarkan planlet dari dalam botol,

Bersihkan dan kurangi bagian akar dan daun bila terlalu panjang

Potong potong planlet 3-4 nodus/ potongan

Tanam dalam media yang baru

Keluarkan dari LAFC, beri label dan inkubasikan

LEMBAR KERJA 5

Judul : induksi akar anyelir

Alat dan bahan

Alat:

1. ruang tanam dengan LAFC

2. alat diseksi (pinset, scalpel+mata pisau,)

3. kaca tanam

4. lampu Bunsen

5. petridish

6. ember untuk sampah

Bahan

1. media MS+BAP 0,5-1ppm

2. planlet yang akan di cutting

3. kertas steril

4. tissue

5. kertas label

Keselamatan kerja

Gunakanlah jas labolatorium saat melakukan kegiatan di dalam labolatorium!

Tidak mencampur bahan kimia tanpa petunjuk teknisi labolatorium atau perosedur kerja!

Gunakan alat alat labolatorium berdasarkan petunjuk kerja!

Apabila terdapat kesulitan bertanyalah pada teknisi praktikum

Langkah kerja

Menyiapkan alat dan bahan yang diperlukan.

Semprotkan tangan terlebih dahulu dengan alcohol 70% sebelum bekerja

Keluarkan planlet dari dalam botol,

Bersihkan dan kurangi bagian akar bila teralu panjang

Tanam dalam media pengakaran

Keluarkan dari LAFC, beri label dan inkubasikan

LEMBAR KERJA 6

Judul : multiplikasi anyelir

Alat dan bahan

Alat:

1. Bak tanam

2. bak pencuci

3. pinset

4. sungkup plasrik (bening)

5. ember untuk sampah

Bahan

1. Media (arang sekam)

2. planlet yang akan aklimatisasi

3. benlate

4. kertas label

Keselamatan kerja

Tidak mencampur bahan kimia tanpa petunjuk teknisi labolatorium atau perosedur kerja!

Gunakan alat alat dab bahan berdasarkan petunjuk kerja!

Apabila terdapat kesulitan bertanyalah pada teknisi praktikum

Langkah kerja

Menyiapkan alat dan bahan yang diperlukan

Isi bak tanam dengan arang sekam sampai leher bak,

Percikkan air hingga jenuh

Buatkan alur tanam 3×5 cm

Keluarkan planlet dari dalam botol

Bersihkan planlet dari sisa agar yang menempel pada media dan pisahkan planlet yang menempel satu dengan yang lainnya dengan perlahan

Rendam dalam larutan fungisida benlate 2 gr/ lt selama 3 menit

Taman sesuai alur tanamn yang telah di buatkan

Tutp rapat dengan plastic sungkup

Inkubasikan dalam paranet dan berikan label.

Perikasa setiap pagi dan sore dan semprotkan air , bila memungkinkan semprotkan zat perangsang akar.

Kontrol pertumbuhannya setelah cukup dewasa dapat langsung di jadikan bibit produksi.

DAFTAR PUSTAKA

Untun Santoso, Fatimah Nursadi. 2002. Kultur Jaringan Tanaman. Universitas Muhammadiyah Malang.

Yusnita Ir, 2003. Kultur jaringan tanaman (cara memperbanyak tanaman secara efisien, agromedia pustaka

]]> http://sobu.wordpress.com/2009/05/16/93/feed/ 0 sobu diacarus01n1 diacarus05n2 diacarus03n2 anyelir2 penanaman ponsel0271 g1 ponsel055